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2XRAPA3GPCR Mix

參  考  價:234 - 1872
具體成交價以合同協議為準
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    生產商

  • 所在地

    上海市

規格

1ml 234元 15盒可售

10ml 1872元 15盒可售

更新時間:2024-05-22 10:31:33瀏覽次數:169次

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貨號 XG-P2978 規格 1ml、10ml
包裝 盒裝 用途 僅供科研研究實驗
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2XRAPA3GPCR Mix

2XRAPA3GPCR Mix

貨號

規格

分類

XG-P2978

1ml

PCR相關

XG-P2978

10ml

PCR相關

RAPA3G DNA聚合酶為經電子重構架的第三代Taq DNA聚合酶,第三代DNA聚合酶具有高度的雜質耐受性、長片段擴增能力、高擴增成功率、高產量等特征,從而使得RAPA3G系列產品可用于粗制樣品的直接擴增,無需核酸純化步驟。雜質耐受性方面,該酶可耐受植物中的多糖多酚;全血、血清、血漿中的肝素、高濃度的血紅蛋白、甘油三脂;乙醇;胍鹽;SDS等強PCR抑制劑。在血液直擴PCR實驗中,RAPA3G PCR Mix性能與KAPA3G DNA聚合酶展現出同等的表現,其性能表現優于二代聚合酶(血液擴增Hemo KlenTaq Mix)。在植物直擴PCR實驗中,RAPA3G PCR Mix在配合DNA釋放劑的條件下與KAPA3G Plant PCR試劑盒性能一致。
長片段擴增能力方面,使用該酶可輕松擴增8kb的基因組片段,20kb的λ DNA,8kb的cDNA。該酶具有6kb/min以上的擴增速度,可顯著的縮短PCR的擴增時間,在常規測試條件下,10s的延伸時間可完成1kb的基因組DNA擴增。在PCR擴增成功率方面,與其它類型的PCR擴增試劑對比中,RAPA3G PCR Mix表現出的PCR擴增成功率。此外,該酶包含一定比例的RAPA HiFi超保真DNA聚合酶,因此其具有一定的保真性能(經藍白斑測試,其保真性能約為Taq DNA聚合酶的56倍)。另外,RAPA3G系列產品均采用專有的熱啟動技術,確保50°C以下無活性,僅有95°C加熱5min以后才能恢復其活性,因此可限度的提高擴增的特異性,減少非特異性產物的產生。該PCR Mix具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的外切酶活性和3'-5'的外切酶活性,產物部分帶有"A"尾巴,部分為平末端,因此產物均可用于TA克隆或平端克隆。

特征和用途

  • 快速擴增:具有6kb/min的擴增能力,1kb片段可在25min內完成擴增.

  • 高成功率擴增:RAPA3G PCR Mix具有的PCR擴增成功率。

  • 液體樣品直接擴增:全血、血清、培養細胞、尿液等樣本直接進行PCR擴增,無需核酸純化。

  • 組織樣本直接擴增:葉片、種子、果實、動物組織等樣品,可以直接擴增,也可采用DNA釋放劑簡單處理后直接擴增,無需核酸純化。

  • 長片段擴增:質粒、λ DNA 等簡單模板可以有效擴增>20 kb,基因組可以有效擴增>8 kb,cDNA可以有效擴增>8kb。

  • 高保真擴增:保真度是 Taq DNA Polymerase 的56 倍。

  • 高特異性:采用專有熱啟動技術,50°C以下無活性,僅有95°C加熱5min才能恢復酶活。

RAPA3G DNA聚合酶對抑制物耐受性

SDS0.01%胍鹽0.25%
乙醇5%全血15%
肝素0.1IU/ml血清15%
Trizol0.5%血漿2%
血紅蛋白30μM尿液5%

50μl體積建議添加的樣品量

抗凝全血2.5 μl培養細胞>100個
血清2.5 μl組織0.1mg
尿液2.5 μl毛發囊1-3個
血漿1 μlgDNA

1-400ng

植物葉片2mmcDNA1-400ng
植物粗提物2-4 μl質粒0.1-10ng

儲存

長期儲存置于-20°C以下,可保存2年,避免反復凍融;短期使用置于4°C(3個月)保存,一經融化后請放置于4°C,勿再凍存。

反應實例

1. 模板適應性強,長片段和短片段都可有效擴增

Lane 1:λDNA 500bp, 2:λDNA 1kb, 3:λDNA 2kb, 4:λDNA 5kb, 5:λDNA 8kb, 6:λDNA 15kb, 7:λDNA 20kb, 8:human 500bp ,9:human 1kb, 10:human 2kb ,11:human 5kb, 12:human 8kb, 13:cDNA 166bp, 14:cDNA 552bp, 15:cDNA 960bp, 16:cDNA 1574bp, 17:cDNA 1705bp, 18:cDNA 2755b,p 19:cDNA 4128bp, 20:cDNA 7600bp, M:DNA Marker 10000
選取三種DNA模板,使用RAPA3G PCR Mix進行擴增,循環數統一為28 cycles,結果如上圖所示,對于不同種類DNA模板和不同長度的靶基因,RAPA3G PCR Mix均有良好的擴增性能。
2. 對于粗制樣品DNA具有的耐受性



分別以人全血、血清、葉片粗制品DNA以及大豆種子粗制品DNA為模板,使用RAPA3G PCR Mix進行PCR擴增,結果如上圖展示,各種粗制樣品都有良好的擴增,其中全血和血清可耐受15%。

3.擴增靈敏度高,λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增




以λDNA為模板,選取不同模板使用量,采用RAPA3G PCR Mix進行擴增2kb靶基因,循環數統一為28 cycles,結果如上圖所示,λDNA模板低至0.1pg也可以有效擴增



2XRAPA3GPCR Mix



2XRAPA3GPCR Mix

一、模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;

二、引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;

三、dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;

四、Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;

五、PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;

六、酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;


2XRAPA3GPCR Mix



2XRAPA3GPCR Mix

①Oligo dT
選擇Oligo dT時,要求RNA必須有Poly A,所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT,對RNA樣品的質量要求較高,不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應,建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT,尤其適合模板豐度很低的情況(比如某個gene表達量很低)。選擇隨機引物時,鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板,然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系,一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng,如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng,可能會導致小片段產物(<500bp)的增加和長片段、全長產物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物(GSP)是某個基因序列的一部分,與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合,每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此,當分析多種目標時,則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同,所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物,建議對退火溫度進行優化。

2XRAPA3GPCR Mix

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