2min DNA/RNA直提試劑盒

本試劑適合從各種組織、體液中快速提取制備 PCR檢測(cè)級(jí)別的基因組 DNA 和 RNA。制備的 DNA 和 RNA 可直接應(yīng)用于 TaqMan PCR、One-Step PCR、LAMP、RPA 的擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。該試劑制備 DNA/RNA 樣品操作及其簡(jiǎn)單，通常2min 內(nèi)可完成制備。
儲(chǔ)存: 室溫保存 6 個(gè)月，若長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃（5 年）。
適用組織類型
從感染病毒的組織樣本中提取病毒 DNA/RNA。
從感染細(xì)菌的組織樣本中提取細(xì)菌 DNA。
從動(dòng)物口腔唾液拭孖中提取病毒 DNA/RNA。
從植物組織中提取 DNA/RNA。
從血漿、血清中提取病毒 DNA/RNA
操作方法
1. 動(dòng)物、植物組織中提取病毒 DNA/RNA將組織樣本約 1~10 mg 放入到 1.5mL EP 管中，并加入500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，加入幾粒鋼珠，置于組織研磨儀中研磨 1min 左右。研磨完畢后加入 100 μl 的DNA/RNA DirOut-B 溶液，漩渦混合均勻（可短離心將未磨碎的組織去除），取 0.5 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等試驗(yàn)即可。注意：組織使用量不要超過 50mg，過多的組織量會(huì)抑制后續(xù) PCR 反應(yīng)。
2. 從血清、血漿、唾液等體液中提取病毒 DNA/RNA在 1.5mL EP 管中加入 100 μl 血清、血漿、唾液等液體樣本，并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，漩渦混合30s。漩渦完畢后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液，漩渦混合均勻，取 0.5 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等試驗(yàn)即可。
3. 從動(dòng)物咀嚼過的沙包或拭孖中提取病毒 DNA/RNA剪切部分動(dòng)物咀嚼過的沙包或拭孖放置到 1.5 ml EP 管中，并加入 500 μl 溶液 DNA/RNA DirOut-A，漩渦混合30s。漩渦完畢后加入 100 μl 的 DNA/RNA DirOut-B 溶液漩渦混合均勻，取 1 μl 的該溶液作為 DNA/RNA 模板，直接用于下游 PCR 等試驗(yàn)即可。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，第鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。