操作步驟：
夾心法，一般的操作步驟為:
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體;
加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結;
洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進行鍵結;
洗去多余未鍵結一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結;
洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果;
間接法，一般的操作步驟為：
將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。
加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。
洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測的一次抗體鍵結。
洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器測定塑膠盤中的吸光值，以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。
競爭法，其操作步驟為：
將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體
加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結
加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。
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注意事項：
1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5 分鐘內，如標本數量多，使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請乘以總稀釋倍數（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物請避光保存。
7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9． 本試劑不同批號組分不得混用。
試劑配制:
1、酶聯板（Assay plate ）：一塊（96孔或者48孔）。
2、標準品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3、樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

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