您好, 歡迎來到環(huán)保在線! 登錄| 免費注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>定量PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T偽牛痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
參 考 價 | 面議 |
產(chǎn)品型號50T
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時間:2021-12-28 17:07:42瀏覽次數(shù):150次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線產(chǎn)品名稱:偽牛痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Pseudocowpox Virus(PCPV)
貨號:XG01P4008
分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
實時定量PCR:
①β-actin陽性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽性模板的濃度為1011,反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋(加水27μl并充分混勻)為1010,依次稀釋至109、108、107、106、105、104,以備用。
②反應(yīng)體系如下:
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號 反應(yīng)物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 陽性模板上游引物F 0.5μl
3 陽性模板下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 陽性模板DNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
基因反應(yīng)體系:
序號 反應(yīng)物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 內(nèi)參照上游引物F 0.5μl
3 內(nèi)參照下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 待測樣品cDNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本同時上機,反應(yīng)條件為:93℃ 2分鐘,然后93℃ 1分鐘,55℃ 2分鐘,共40個循環(huán)。
PCR特異性:
1.primers design
這是重要的一步。理想的,只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件:
1)足夠長,18~24bp,以保證特異性,當(dāng)然,不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產(chǎn)量;
2)GC%,40%~60%;
3)5'端和中間序列要多GC,以增加穩(wěn)定性;
4)避免3'端GCrich,個BASE不要有GC,或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補,否則,容易造成DIMER;
6)避免3'端的錯配;
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu);
8)附加序列(RT site,Promoter sequence)加到5'端,在算Tm值時不算,但在檢測互補和二級結(jié)構(gòu)要加上它們;
9)使用兼并primer時,要參考密碼子使用表,注意:生物偏好性,不要在3'端使用兼并primer,并使用較高的primer濃度(1μM~3μM);
10)學(xué)會使用一種design software,PP5,Oligo6,DNA star,Vector NTI,Online design et al。
NZCYM瓊脂/NZCYM AgarBR100克國產(chǎn)/進(jìn)口
*/脫氫膽酸/3,7,12-三氧-5β-膽烷酸/Dehydrocholic acidBR,98.5%10/100/500克國產(chǎn)/進(jìn)口
全胃蛋白胨BR250克國產(chǎn)/進(jìn)口
肉浸液瓊脂/Meat Infusion Agar一般細(xì)菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
酸菌液體培養(yǎng)基/Lactobacillus Fluid Medium250克國產(chǎn)/進(jìn)口
糖-明膠培養(yǎng)基/Lactose-Gelatin Medium產(chǎn)氣莢膜梭菌明膠液化試驗250克國產(chǎn)/進(jìn)口
三糖鐵瓊脂培養(yǎng)基/三糖鐵培養(yǎng)基/TSI瓊脂/Triple Sugar Iron Agar腸桿菌科細(xì)菌的生化試驗250克國產(chǎn)/進(jìn)口
沙門氏志賀氏屬瓊脂培養(yǎng)基/SS瓊脂/Salmonella Shigella Agar沙門氏菌屬和志賀氏菌屬的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
*麥康凱瓊脂基礎(chǔ)/*麥康克瓊脂基礎(chǔ)/SMAC大腸桿菌O157:H7的選擇性分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(不含瓊脂)/需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基/Thioglycollate Medium(Without Agar)用于產(chǎn)氣莢膜梭菌確證試驗的細(xì)菌培養(yǎng)(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))250克國產(chǎn)/進(jìn)口
高分化鼻咽細(xì)胞英文名稱:CNE-1
CCRF-CEM(人急性淋巴白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
甲狀旁腺激素(PTH)重組蛋白英文名稱:Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)
偽牛痘病毒探針法熒光定量PCR試劑盒小鼠小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)00mL 2006
戊*標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 2152445 Betamethasone Valerate 進(jìn)口、國產(chǎn) 200mg
TET2英文名稱:RAP2BEphrin B抗體
雙瞇標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 33089611 Amitraz 進(jìn)口、國產(chǎn) 200mg
戊*相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 2240280 進(jìn)口、國產(chǎn) 50mg
10309372Exonuclease I4000 units豬血管生成素2(ANG2)免疫試劑盒
*標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 549188 Amitriptyline 進(jìn)口、國產(chǎn) 200mg
倍他爾標(biāo)準(zhǔn)品 CAS: 63659198 Betaxolol 進(jìn)口、國產(chǎn) 200mg
53947925Exonuclease I20000 units豬血管生成素1(ANG1)免疫試劑盒
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),環(huán)保在線對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。