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產品名稱:巨細胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Cytomegalovirus(CMV)
貨號:XG01P3502
分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
實時定量PCR:
①β-actin陽性模板的標準梯度制備 陽性模板的濃度為1011,反應前取3μl按10倍稀釋(加水27μl并充分混勻)為1010,依次稀釋至109、108、107、106、105、104,以備用。
②反應體系如下:
標準品反應體系
序號 反應物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 陽性模板上游引物F 0.5μl
3 陽性模板下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 陽性模板DNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
基因反應體系:
序號 反應物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 內參照上游引物F 0.5μl
3 內參照下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 待測樣品cDNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標準品和檢測樣本同時上機,反應條件為:93℃ 2分鐘,然后93℃ 1分鐘,55℃ 2分鐘,共40個循環。
PCR特異性:
1.primers design
這是重要的一步。理想的,只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件:
1)足夠長,18~24bp,以保證特異性,當然,不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量;
2)GC%,40%~60%;
3)5'端和中間序列要多GC,以增加穩定性;
4)避免3'端GCrich,個BASE不要有GC,或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補,否則,容易造成DIMER;
6)避免3'端的錯配;
7)避免內部形成二級結構;
8)附加序列(RT site,Promoter sequence)加到5'端,在算Tm值時不算,但在檢測互補和二級結構要加上它們;
9)使用兼并primer時,要參考密碼子使用表,注意:生物偏好性,不要在3'端使用兼并primer,并使用較高的primer濃度(1μM~3μM);
10)學會使用一種design software,PP5,Oligo6,DNA star,Vector NTI,Online design et al。
鈦鍶99.5%tracemetalsbasis,納米,<100nm3,28-Di-O-(3,3-dimethylglutaryl)betulin,Semisyntheticderivativeofbetulin
葉≥97%(HPLC)Dihydrochlamydocin,PutativeHDACinhibitor
L-苯氨99%Dihydrochlamydocin,PutativeHDACinhibitor
99%6-ECDCA(INT-747),FXRagonist
D-木糖98%6-ECDCA(INT-747),FXRagonist
2-叔基對酚99%Echinomycin,HIF-1alphainhibitor
2,6-二叔基對酚CP,98%Echinomycin,HIF-1alphainhibitor
2,6-二叔基對酚分析標準品,>99.7%(GC)Ferulenol,ATPsynthesisinhibitor
2,6-二叔基對酚GR,>99.0%(GC)Ferulenol,ATPsynthesisinhibitor
2,6-二叔基對酚超純級,>99.5%(GC)Ferulenol,ATPsynthesisinhibitor
對羥基苯醛AR,98%Ferutinin,ERalphaagonist
2-硝基苯醛99%Ferutinin,ERalphaagonist
三氟酰胺97%Ferutinin,ERalphaagonist
DL-苯氨>98.0%(HPLC)Fostriecin,PP2AandPP4inhibitor
DL-苯氨≥98.5%,FCCFulvicacid,colloidalpoly-electrolyte
巨細胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒無水腈H2O:20-30ppmAnti-CMT2antibody[EPR9584]
無水腈無水級,99.8%,H2O:30-50ppmAnti-CMT2antibody[EPR9584]
N,N-二基酰胺無水級,99.8%Anti-CMT2antibody[EPR9584]
酯ACS,≥99.5%Anti-CYP2C9antibody[EPR7340]
酯forHPLC,99.9%Anti-CYP2C9antibody[EPR7340]
正己烷forHPLC,≥98.0%(GC)Anti-CYP2C9antibody[EPR7340]
正己烷StandardforGC,>99.5%(GC)Anti-Raf1(phosphoS43)antibody[EPR5692(2)]
正己烷>99%(GC)Anti-Raf1(phosphoS43)antibody[EPR5692(2)]
正己烷光譜純,≥98.0%(GC)Anti-Raf1(phosphoS43)antibody[EPR5692(2)]
正己烷ACS,>98.5%(GC)Anti-Proteasome20Sbeta6antibody[EPR9685]
醇無酮,用于Romanowsky醇染色法Anti-Proteasome20Sbeta6antibody[EPR9685]
醇梯度色譜級,≥99.9%Anti-Proteasome20Sbeta6antibody[EPR9685]
四光譜級,≥99.5%Anti-LC3Cantibody[EPR8077]
四forHPLC,≥99.9%Anti-LC3Cantibody[EPR8077]
苯酐98%Anti-LC3Cantibody[EPR8077]
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
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