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倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒

參  考  價面議
具體成交價以合同協議為準

產品型號50T

品       牌其他品牌

廠商性質生產商

所  在  地上海市

更新時間:2020-10-06 13:44:42瀏覽次數:114次

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倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒
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具體計算如下:
RNA溶于40 ?l DEPC水中,取5ul,1:100稀釋至495?l的TE中,測得A260 = 0.21
RNA 濃度= 0.21 ×100 ×40 ?g/ml = 840 ?g/ml 或 0.84 ?g/?l
取5ul用來測量以后,剩余樣品RNA為35 ?l,剩余RNA總量為:35 ?l × 0.84 ?g/?l = 29.4 ?g
②純度檢測
RNA溶液的A260/A280的比值即為RNA純度,比值范圍1.8到2.1。
2)變性瓊脂糖凝膠電泳測定
①制膠
1g瓊脂糖溶于72ml水中,冷卻至60℃,10 ml的10× MOPS電泳緩沖液和18 ml的37% (12.3 M)。10×MOPS電泳緩沖液
濃度  成分
0.4M  MOPS,pH 7.0
0.1M  乙酸鈉
01M  EDTA
灌制凝膠板,預留加樣孔至少可以加入25 ?l溶液。膠凝后取下梳子,將凝膠板放入電泳槽內,加足量的1×MOPS電泳緩沖液至覆蓋膠面幾個毫米。
②準備RNA樣品
取3?gRNA,加3倍體積的甲醛上樣染液,加EB于甲醛上樣染液中至終濃度為10?g/ml。加熱至70℃孵育15分鐘使樣品變性。
③電泳
上樣前凝膠須預電泳5min,隨后將樣品加入上樣孔。5-6V/cm電壓下2h,電泳至溴酚蘭指示劑進膠至少2-3cm。
④紫外透射光下觀察并拍照
28S和18S核糖體RNA的帶非常亮而濃(其大小決定于用于抽提RNA的物種類型),上面一條帶的密度大約是下面一條帶的2倍。還有可能觀察到一個更小稍微擴散的帶,它由低分子量的RNA(tRNA和5S核糖體RNA)組成。在18S和28S核糖體帶之間可以看到一片彌散的EB染色物質,可能是由mRNA和其它異型RNA組成。RNA制備過程中如果出現DNA污染,將會在28S核糖體RNA帶的上面出現,即更高分子量的彌散遷移物質或者帶,RNA的降解表現為核糖體RNA帶的彌散。用數碼照相機拍下電泳結果。

客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA,設計并合成引物,完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析,提供實驗報告給您。

產品名稱

 倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒

 英文名稱

 Chrysomya bezziana

 貨號

 XG01P3440

產品特點:
靈敏度高:可檢測個位拷貝數的基因
特異性高:有效避免非特異性擴增的出現
穩定性高:復孔間差異小,實驗結果重復性強
擴增性能優:擴增效率高,熒光信號強

 

注意事項:
1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。

2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。
3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。
4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。
5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

樣品RNA的抽提:

①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1)紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 ?g RNA/ml。樣品RNA濃度(?g/ml)計算公式為:A260 ×稀釋倍數× 40 ?g/ml。

十四烷基三基99%Biotin-DEVD-FMK,caspase-3inhibitor

胺鹽鹽CP,97.0%Z-AAD-CH2Cl,granzymeBinhibitor

四基AR,99.0%Z-VDVAD-FMK,caspase-2inhibitor

三胺鹽鹽99%Z-VDVAD-FMK,caspase-2inhibitor

四基化銨ARBoc-D-FMK,caspaseinhibitor

四基98%Boc-D-FMK,caspaseinhibitor

4,5-二基咪唑98%Q-DEVD-OPh,caspase-3inhibitor

二苯砜99%Q-DEVD-OPh,caspase-3inhibitor

2-氨基-4-基吡97%Q-IETD-OPh,caspase-8inhibitor

2-氨基-4-基吡98%Q-IETD-OPh,caspase-8inhibitor

烯基三基硅烷98%Q-LEHD-OPh,caspase-9inhibitor

N,O-雙(三基硅烷基)三氟96%Q-LEHD-OPh,caspase-9inhibitor

叔基二基硅烷基三氟烷磺酯98%TCEPhydrochloride(tris(2-carboxyethyl)phosphinehydrochloride),non-thiolreducingreagent

三基硅烷98%ABTS™,Peroxidasesubstrate

N,N-二基三基硅烷基胺98%TMB,Peroxidasesubstrate(Ultrasensitive)
倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒4-羥基苯酰肼98%CecropinB,antibacterialpeptide

組胺96%Cefotaximeacid,cephalosporinantibiotic

雙(三基硅烷基)氨基鋰95%Cefotaximeacid,cephalosporinantibiotic

鄰基化芐99%Cefotaximeacid,cephalosporinantibiotic

酯99%,光譜純Cefotaximesodium,cephalosporinantibiotic

酯99%Cefotaximesodium,cephalosporinantibiotic

3-巰基酯98%Cefotaximesodium,cephalosporinantibiotic

蒙脫土K-10蒙脫土K-10,比表面積240m²/gCefuroximesodiumsalt,cephalosporinantibiotic

蒙脫土KSF蒙脫土KSF,10m²/gCefuroximesodiumsalt,cephalosporinantibiotic

聚二醇單醚均分子量350Climbazole,CYP2B1andCYP3A2inducer

聚二醇單醚均分子量750Climbazole,CYP2B1andCYP3A2inducer

聚二醇單醚平均分子量500Climbazole,CYP2B1andCYP3A2inducer

亞麻酯分析標準品Clinafloxacinhydrochloride,fluoroquinoloneantibiotic

汞溴紅24~27%Clinafloxacinhydrochloride,fluoroquinoloneantibiotic

(s)-(+)-α-氧基-α-(三氟基)苯酰99%Clinafloxacinhydrochloride,fluoroquinoloneantibiotic

樣品cDNA合成:
①反應體系
序號  反應物  劑量
1  逆轉錄buffer  2μl
2  上游引物  0.2μl
3  下游引物  0.2μl
4 dNTP  0.1μl
5  逆轉錄酶MMLV  0.5μl
6  DEPC水  5μl
7  RNA模版  2μl
8  總體積  10μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
②混合液在加入逆轉錄酶MMLV 之前先70℃干浴3分鐘,取出后立即冰水浴至管內外溫度一致,然后加逆轉錄酶0.5μl,37℃水浴60分鐘。
③取出后立即95℃干浴3分鐘,得到逆轉錄終溶液即為cDNA溶液,保存于-80℃待用。

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