產品名稱：鸚鵡喙羽病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Beak and Feather Disease Virus（BFDV）
貨號：XG01P3323
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

實時定量PCR：
①β-actin陽性模板的標準梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應體系如下：
標準品反應體系
序號  反應物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

基因反應體系：
序號  反應物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內參照上游引物F  0.5μl
3  內參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標準品和檢測樣本同時上機，反應條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環。
PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當然，不是說越長越好，太長的primer同樣會降低特異性，并且降低產量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩定性；
4)避免3'端GCrich，個BASE不要有GC，或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯配；
7)避免內部形成二級結構；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時不算，但在檢測互補和二級結構要加上它們；
9)使用兼并primer時，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學會使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

1,4-二溴烷98%RecombinantHumanTDP1protein(denatured)

1,5-二溴戊烷98%RecombinantHumanCTLA4protein(denatured)

1,6-二溴己烷97%RecombinantHumanCytokeratin19protein(denatured)

間二溴苯97%RecombinantHumanBASP1protein

溴代異戊烷96%RecombinantHumanYKL-40/CHI3L1protein

溴酯97%RecombinantHumanMAD3protein(denatured)

溴烷>99.0%(GC)RecombinantHumanDEDDprotein(denatured)

三溴烷AR,98%RecombinantHumanOct4protein(denatured)

香柏油FMP(顯微鏡用）RecombinantHumanCathepsinSprotein(denatured)

代十六烷97%RecombinantHumanCD226protein(denatured)

烯酰,96%,含~0.05%噻吩嗪穩定RecombinantHumanRAB10protein(denatured)

2-氨基-6-基吡98%Anti-AnnexinV/ANXA5antibody

烯酯99%GlucagonReceptorpeptide

2-氨基-5-基吡99%Anti-EphrinB2antibody

溴烯,包含≤1000ppm烯穩定,98%Anti-EGFL6antibody
鸚鵡喙羽病病毒探針法熒光定量PCR試劑盒1,4-二磺二鈉鹽BCRecombinantHumanAMNprotein

1,4-二磺倍半鈉鹽99%RecombinantHumanGLTPprotein

1,4-二磺二鉀鹽BCRecombinantRatTrefoilFactor3protein

-N,N-雙(2-羥基烷磺)二鈉鹽BCRecombinantHumanAICDAprotein(denatured)

十八烷基三基化銨98%RecombinantHumanUteroglobinprotein

十八烷基三基99%RecombinantHumanKLRG1protein(denatured)

基烯2-磺酯鈉鹽99%RecombinantHumanCD3zetaprotein

代甜菜1298%RecombinantHumanFasLigandprotein(denatured)

三(羥基)基甘氨99%RecombinantMousegalectin9/Gal-9protein(denatured)

三(羥基)基甘氨99.5%RecombinantHumanCALML3protein

3,3′,5,5′-四基聯苯≥99%(HPLC)RecombinantHumanSLAM/CD150protein(denatured)

十四烷基三基化銨99%Anti-CRCPantibody[EPR9670(B)]

Tris磺99%Anti-CRCPantibody[EPR9670(B)]

Tris磺Ultrapure,≥99.5%（T）Anti-CRCPantibody[EPR9670(B)]

N-三(羥基)基-2-氨基磺單鈉鹽99%Anti-PCDH7antibody[OTI2G6]

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。