PCR特異性：
1.primers design
這是重要的一步。理想的，只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件：
1)足夠長，18～24bp，以保證特異性，當(dāng)然，不是說越長越好，太長的primer同樣會降低特異性，并且降低產(chǎn)量；
2)GC%，40%~60%；
3)5'端和中間序列要多GC，以增加穩(wěn)定性；
4)避免3'端GCrich，個BASE不要有GC，或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補，否則，容易造成DIMER；
6)避免3'端的錯配；
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu)；
8)附加序列(RT site，Promoter sequence)加到5'端，在算Tm值時不算，但在檢測互補和二級結(jié)構(gòu)要加上它們；
9)使用兼并primer時，要參考密碼子使用表，注意：生物偏好性，不要在3'端使用兼并primer，并使用較高的primer濃度(1μM～3μM)；
10)學(xué)會使用一種design software，PP5，Oligo6，DNA star，Vector NTI，Online design et al。

產(chǎn)品名稱：腺病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Adenovirus(AV)
貨號：XG01P3239
分類：熒光定量PCR試劑盒
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。

熒光定量PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
實時定量PCR：
①β-actin陽性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽性模板的濃度為1011，反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋（加水27μl并充分混勻）為1010，依次稀釋至109、108、107、106、105、104，以備用。
②反應(yīng)體系如下：
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號  反應(yīng)物  劑量
1   SYBR Green 1 染料  10μl
2  陽性模板上游引物F  0.5μl
3  陽性模板下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  陽性模板DNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。

異苯酯99%,蛋白測序級Anti-DNAPKcsantibody[EPR392]

異苯酯99%,用于HPLC標(biāo)記Anti-DNAPKcsantibody[EPR392]

疊氮鈉AR,99%（劇品）Anti-DNAPKcsantibody[EPR392]

2,3,5-三基98%Anti-PTNantibody[EP3040(2)]

三二醇醚85%Anti-PTNantibody[EP3040(2)]

內(nèi)消旋-2,3-二巰基二98%Anti-PTNantibody[EP3040(2)]

青蒿素98%Anti-LRRK2antibody[UDD330(12)]

烏堿≥97%(HPLC)Anti-S100alphaantibody[EPR5250]

防己諾林堿分析標(biāo)準(zhǔn)品，>98%Anti-S100alphaantibody[EPR5250]

銀杏(C17:1)分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-S100alphaantibody[EPR5250]

分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98%Anti-HOXB4antibody[EPR1917]

煙堿分析標(biāo)準(zhǔn)品（劇品）Anti-HOXB4antibody[EPR1917]

原阿片堿98%Anti-HOXB4antibody[EPR1917]

奎尼98%Anti-PLCG2antibody[EPR5914-34]

茄尼醇96%Anti-PLCG2antibody[EPR5914-34]
腺病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒9,9-二基芴98%Anti-ECHS1antibody

9,9-二基芴99%Anti-Cystathionase/CTHantibody

2,7-二溴-9,9-雙十二烷基芴97%Anti-VKORC1L1antibody-C-terminal

3,6-二溴咔唑98%Anti-SRBCantibody

二叔基氯化膦96%Anti-FBXO45antibody

二溴雙(三苯基)化鎳99%Anti-MUC1antibody[G22-L]

4,7-二溴-2,1,3-苯并噻二唑98%Anti-WDR18antibody-N-terminal

9,9-二辛基-2,7-二溴基芴97%Anti-HOXC9antibody-C-terminal

9,9-二己基-2,7-二溴芴97%Anti-HBEantibody

3-癸基噻吩98%Anti-Gm13152antibody-N-terminal

9，9-二基-2，7-二溴芴98%Anti-YIF1Aantibody-N-terminal

3,4-二氧基噻吩97%Anti-S100antibody[D28-E]

2,7-二溴芴98%Anti-EBVLatentMembraneProtein1antibody[D24-G]

二苯并噻吩99%GoatAnti-RabbitIgGH&L(HRP)

[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀Pd14.5%Anti-ARL13Bantibody[N295B/66]

基因反應(yīng)體系：
序號  反應(yīng)物  劑量
1  SYBR Green 1 染料  10μl
2  內(nèi)參照上游引物F  0.5μl
3  內(nèi)參照下游引物R  0.5μl
4  dNTP  0.5μl
5  Taq酶  1μl
6  待測樣品cDNA  5μl
7  ddH2O  32.5μl
8  總體積  50μl
輕彈管底將溶液混合，6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本同時上機，反應(yīng)條件為：93℃　2分鐘，然后93℃ 1分鐘，55℃ 2分鐘，共40個循環(huán)。