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樣品收集、處理及保存方法:
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產品名稱 | AhR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Human aryl hydrocarbon receptor, AhR Elisa Kit |
貨號 | XG00H1296 |
?測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后,應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發,板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟,但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
實驗原理:
是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
標本要求:
1. 血清::溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
2. 血漿:根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
3. 尿液:無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。
下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。
1.樣品稀釋 酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋,不可避免會產生很強的非特異性反應,出現假陽性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規定將血清稀釋至適當的倍數,以降低非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶未能嚴格按使用說明書操作,如某些產品應取10μl樣品進行稀釋,個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋,由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠,因此造成樣品稀釋倍數不準確,檢測結果出現問題。
2.試劑盒平衡 試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠,樣品孵育時間相對縮短,ELISA反應不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。
3.樣品和試劑的混勻 稀釋前、后的樣品必須充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。
下列是公司是正在的產品:
Oct-1胚胎干細胞關鍵蛋白1抗體RecombinanthumanTrkCprotein
OCLN/Occludin緊密連接蛋白抗體RecombinanthumanTrkCprotein
OCIAD2卵巢癌免疫反應抗原抗體RecombinanthumanPBK/SPKprotein
OCIAD1卵巢癌免疫反應抗原抗體RecombinanthumanPBK/SPKprotein
OCEL1緊密連接蛋白/小分子膠原蛋白OCEL1抗體RecombinanthumanNAK/TBK1protein
OCC1結腸癌過度表達蛋白1抗體RecombinanthumanNAK/TBK1protein
OAT4L/URAT1尿鹽重吸收轉運子1抗體RecombinanthumanNAK/TBK1protein
OAT-3陰離子轉運蛋白-3抗體Anti-Recoverinantibody
OAT-1/SLC22A6陰離子轉運蛋白-1抗體RecombinanthumanSRPK2protein
OAT-1/SLC22A6陰離子轉運蛋白-1抗體RecombinanthumanSRPK2protein
OAS1寡腺苷合成酶-1Anti-RNF31/HOIPantibody
NYS48NYS48蛋白抗體RecombinanthumanSRPK1protein
NXPH2神經外營養蛋白2抗體RecombinanthumanSRPK1protein
NXPH1神經外營養蛋白1抗體RecombinanthumanRSK4protein
NUSAP1核仁和紡錘體相關蛋白1抗體RecombinanthumanRSK4protein
AhR檢測試劑盒 MCPIP1單核細胞趨化誘導蛋白1抗體RecombinantchickenIL-10protein(Active)
MCP-3/CCL7單核細胞趨化蛋白3抗體Anti-PI3Kinasecatalyticsubunitalpha/PIK3CAantibody
MCP-3/CCL7單核細胞趨化蛋白3抗體Anti-LeukotrieneB4Receptor2antibody
MCP-2/CCL8單核細胞趨化蛋白2抗體(小鼠)Anti-SMG6antibody
MCP-2/CCL8單核細胞趨化蛋白2抗體AcetylCoAAssayKit
MCP1/CCL2單核細胞趨化蛋白1抗體Anti-HRGbeta1antibody
MCP1/CCL2單核細胞趨化蛋白1抗體Anti-IL1ReceptorI/IL-1R-1antibody(Biotin)
MCM7微小染色體維持缺陷蛋白7抗體Anti-FSIP1antibody
MCM5微小染色體維持缺陷蛋白5抗體Anti-C22orf25antibody
MCM3微小染色體維持缺陷蛋白3抗體Anti-APOBEC3Fantibody
MCM2微小染色體維持缺陷蛋白2抗體Anti-ENPP6antibody
Mcl1/BCL2L3髓樣分化蛋白2抗體Anti-P2X5antibody
MCKD2/UMOD尿調節蛋白抗體Anti-CREG2antibody
MCKD2/UMOD尿調節蛋白抗體Anti-CaMKIIalphaantibody
MCK10/CD167a/DDR1神經上皮酪氨激酶抗體(乳腺癌激酶10)Anti-RNAHelicaseAantibody
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