實驗原理：
是采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法：
1、   血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、   血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、   細胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
4、   組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液
5、   保存------如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

標本要求：
1. 血清：：溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
2. 血漿：根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
3. 尿液：無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，或組織蛋白萃取試劑，用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術要求，在檢測過程中除正常反應外，有時常見到一些錯誤的結果。引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有：
①標本因素；
②試劑因素；
③操作因素。
下面就一些常見ELISA操作過程中的問題一一分析。
1．樣品稀釋 酶聯免疫反應是一種敏感性很高的反應，如果血清不稀釋，不可避免會產生很強的非特異性反應，出現假陽性。因此，國外檢測血清抗體的試劑盒，均規定將血清稀釋至適當的倍數，以降低非特異性反應，使特異性的抗原抗體反應充分體現出來。一般產品的樣品稀釋倍數均通過大量試驗確定，以保證試驗的靈敏度和特異性。但是，有些用戶未能嚴格按使用說明書操作，如某些產品應取10μl樣品進行稀釋，個別用戶取5μl甚至1μl樣品進行稀釋，由于吸嘴上不可避免地沾有樣品以及微量移液器的精度不夠，因此造成樣品稀釋倍數不準確，檢測結果出現問題。
2．試劑盒平衡 試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫（約25℃），一般需在室溫放置20～30分鐘以上。平衡時間太短會造成試劑混勻不夠，樣品孵育時間相對縮短，ELISA反應不夠充分。冬季室溫低，可將試劑盒置37℃溫箱20分鐘。 
3．樣品和試劑的混勻 稀釋前、后的樣品必須充分混勻，所有試劑在加樣前也須搖勻，以保證試驗的均一性。
下列是公司是正在的產品：

RabbitAnti-humansIgA/APCAPC標記的兔抗人分泌型IgAAnti-Flotillin1antibody[EP446Y]

RabbitAnti-humansIgA/AlexaFluor647AlexaFluor647標記的兔抗人分泌型IgAAnti-UroplakinIIIantibody[SFI-1]

RabbitAnti-humansIgA/AlexaFluor555AlexaFluor555標記的兔抗人分泌型IgAAnti-UroplakinIIIantibody[SFI-1],prediluted

RabbitAnti-humansIgA/AlexaFluor488AlexaFluor488標記的兔抗人分泌型IgAAnti-Dab1(phosphoY232)antibody

RabbitAnti-humansIgA/AlexaFluor350AlexaFluor350標記的兔抗人分泌型IgAAnti-AIRE(phosphoS156)antibody

RabbitAnti-humanIgM/RBITC羅丹明標記的兔抗人IgMAnti-HRH1/H1Rantibody

RabbitAnti-humanIgM/PE-Cy7PE-Cy7標記的兔抗人IgMAnti-Acetylcholinesteraseantibody

RabbitAnti-humanIgM/PE-Cy5.5PE-Cy5.5標記的兔抗人IgMAnti-Aquaporin2antibody

RabbitAnti-humanIgM/PE-CY5PE-CY5標記的兔抗人IgMAnti-CDAantibody

RabbitAnti-humanIgM/PE-Cy3PE-Cy3標記的兔抗人IgMAnti-DERL3antibody

RabbitAnti-humanIgM/PEPE標記的兔抗人IgMAnti-CD20antibody[EP459Y]

RabbitAnti-humanIgM/HRP辣根過氧化物酶標記的兔抗人IgMAnti-CD20antibody[EP459Y]

RabbitAnti-humanIgM/Gold膠體金標記的兔抗人IgMAnti-CD20antibody[EP459Y]

RabbitAnti-humanIgM/FITCFITC標記的兔抗人IgMAnti-GAB2(phosphoY643)antibody

RabbitAnti-humanIgM/Cy7Cy7標記的兔抗人IgMAnti-Laminin5antibody[P3H9-2]
DNase-Ⅰ檢測試劑盒WBSCR14/ChREBP糖類應答元件結合蛋白ChREBP抗體Anti-CyclinE1antibody

WASF3Verprolin同源結構域包含蛋白3抗體Anti-CyclinE1antibody

WASF2WASF2抗體Anti-MMP9antibody

WASF1/WAVE1WAVE1蛋白抗體Anti-MMP9antibody

WAPLEBV核蛋白2抗體Anti-MMP9antibody

VWF血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體Anti-Caspase-1antibody

VWCEVWCE抗體Anti-Caspase-1antibody

VWCEVWCE抗體Anti-Acidsphingomyelinaseantibody[mAbcam74281]

VTN/Vitronectin玻璃粘連蛋白抗體Anti-Acidsphingomyelinaseantibody[mAbcam74281]

VTG魚、青鳉魚卵黃蛋白原抗體Anti-PARPantibody

VSV-GtagVSV-Gtag標簽抗體Anti-PARPantibody

VSIG4T淋巴細胞負調節蛋白抗體Anti-PARPantibody

VRK1牛痘病毒相關激酶1抗體（絲氨/蘇氨蛋白激酶VRK1）Anti-Pofut1antibody

VPS4a液泡分選蛋白4抗體Anti-GTF3C5antibody

VPS18空泡分選蛋白18抗體Anti-POLD3antibody

測定步驟：

1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣，不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后，應立即放入按規定的反應溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后，反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在實驗臺上，以便 不時觀察，待對照管顯色適當時，即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟，但卻 是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺，在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果，準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。