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當(dāng)前位置:上海西格生物科技有限公司>>定量PCR試劑盒>>熒光定量PCR試劑盒>> 50T傘枝梨頭霉探針法熒光定量PCR試劑盒
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產(chǎn)品型號50T
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時間:2020-10-15 14:16:15瀏覽次數(shù):204次
聯(lián)系我時,請告知來自 環(huán)保在線產(chǎn)品名稱:傘枝梨頭霉探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱:Absidia corymbifera
貨號:XG01P3214
分類:熒光定量PCR試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
實時定量PCR:
①β-actin陽性模板的標(biāo)準(zhǔn)梯度制備 陽性模板的濃度為1011,反應(yīng)前取3μl按10倍稀釋(加水27μl并充分混勻)為1010,依次稀釋至109、108、107、106、105、104,以備用。
②反應(yīng)體系如下:
標(biāo)準(zhǔn)品反應(yīng)體系
序號 反應(yīng)物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 陽性模板上游引物F 0.5μl
3 陽性模板下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 陽性模板DNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
基因反應(yīng)體系:
序號 反應(yīng)物 劑量
1 SYBR Green 1 染料 10μl
2 內(nèi)參照上游引物F 0.5μl
3 內(nèi)參照下游引物R 0.5μl
4 dNTP 0.5μl
5 Taq酶 1μl
6 待測樣品cDNA 5μl
7 ddH2O 32.5μl
8 總體積 50μl
輕彈管底將溶液混合,6000rpm短暫離心。
③制備好的陽性標(biāo)準(zhǔn)品和檢測樣本同時上機(jī),反應(yīng)條件為:93℃ 2分鐘,然后93℃ 1分鐘,55℃ 2分鐘,共40個循環(huán)。
PCR特異性:
1.primers design
這是重要的一步。理想的,只同目的序列兩側(cè)的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面一些條件:
1)足夠長,18~24bp,以保證特異性,當(dāng)然,不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產(chǎn)量;
2)GC%,40%~60%;
3)5'端和中間序列要多GC,以增加穩(wěn)定性;
4)避免3'端GCrich,個BASE不要有GC,或者5個有3個不要是GC。
5)避免3'端的互補(bǔ),否則,容易造成DIMER;
6)避免3'端的錯配;
7)避免內(nèi)部形成二級結(jié)構(gòu);
8)附加序列(RT site,Promoter sequence)加到5'端,在算Tm值時不算,但在檢測互補(bǔ)和二級結(jié)構(gòu)要加上它們;
9)使用兼并primer時,要參考密碼子使用表,注意:生物偏好性,不要在3'端使用兼并primer,并使用較高的primer濃度(1μM~3μM);
10)學(xué)會使用一種design software,PP5,Oligo6,DNA star,Vector NTI,Online design et al。
1-二茚酮99%Anti-NADPHoxidase4antibody[UOTR1B493]
二酰97%Anti-NADPHoxidase4antibody[UOTR1B493]
4-硝基肉桂98%Anti-NADPHoxidase4antibody[UOTR1B493]
苯二98%Anti-TEF1/TEAD-1antibody[EPR5278(2)]
3,4,5-三氧基肉桂99%Anti-TEF1/TEAD-1antibody[EPR5278(2)]
二苯基(2,4,6-三基苯?;╈?7%Anti-TEF1/TEAD-1antibody[EPR5278(2)]
槲皮素,二水97%Anti-ALDH2antibody[EPR4494]
槲皮素分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98.5%Anti-ALDH2antibody[EPR4494]
槲皮素97%Anti-ALDH2antibody[EPR4494]
槲皮素,二水分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%(HPLC)Anti-MaltoseBindingProteinantibody[EPR4745]
L-鼠李糖,一水99%Anti-MaltoseBindingProteinantibody[EPR4745]
二脲98%Anti-MaltoseBindingProteinantibody[EPR4745]
4,5-二鄰苯二胺98%Anti-NSEantibody[EPR3378]
酰肼90%Anti-NSEantibody[EPR3378]
鄰苯胺98%Anti-NSEantibody[EPR3378]
傘枝梨頭霉探針法熒光定量PCR試劑盒BOC-L-環(huán)己基甘氨98%Anti-ACY-1antibody[EPR8444]
BOC-D-環(huán)己基甘氨98%Anti-MethylmalonylCoenzymeAmutaseantibody[EPR7738]
BOC-L-環(huán)基氨BRAnti-MethylmalonylCoenzymeAmutaseantibody[EPR7738]
BOC-D-環(huán)基氨BRAnti-MethylmalonylCoenzymeAmutaseantibody[EPR7738]
BOC-L-高苯氨BRAnti-eIF3eantibody[EPR6878(2)]
BOC-D-高苯氨BRAnti-eIF3eantibody[EPR6878(2)]
BOC-D-絲氨酯98%Anti-eIF3eantibody[EPR6878(2)]
DL-半胱氨鹽鹽,一水98%Anti-ThromboxaneA2receptor/TBXA2Rantibody[EPR7336]
DL-胱氨鹽鹽98%Anti-ThromboxaneA2receptor/TBXA2Rantibody[EPR7336]
DL-胱氨98%Anti-ThromboxaneA2receptor/TBXA2Rantibody[EPR7336]
L-瓜氨98%Anti-RPL13antibody[EPR8828]
羧芐霉素鈉USP級Anti-RPL13antibody[EPR8828]
D-環(huán)基氨BRAnti-RPL13antibody[EPR8828]
L-環(huán)基氨BRAnti-PEX7antibody[EPR7714(2)(B)]
DL-環(huán)基氨BRAnti-PEX7antibody[EPR7714(2)(B)]
熒光定量PCR實驗步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
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