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血清樣本處理:
1、血清細胞培養上清
血清細胞培養上清到離心管,1000×g離心20min,除去細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
2、血清細胞裂解液
1)吸去培養板內的培養基,用消化血清細胞,加適量培養基將細胞從培養板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2)收集血清細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養基,用預冷的PBS潤洗3次。
3)加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復凍融幾次,使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的目的。
3、血清
血清血清是zui常用于ELISA試劑盒檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。
采血過程中應避免溶血,因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為標記的ELISA試劑盒檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染,因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
4、血漿
用含血清的或離心管采集血液標本,標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
常用的抗凝劑為EDTA、和等,檢測時還應仔細閱讀試劑盒說明書,檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
氟胺氰菊酯 標準品 :102851-06-9 250mg
滅菌丹 標準品 :133-07-3 250mg
氟磺胺草醚 標準品 :72178-02-0 100mg
甲酰胺黃隆 標準品 :173159-57-4 100MG
氯吡脲 標準品 :68157-60-8 100mg
伐蟲脒鹽酸鹽 標準品 :23422-53-9 250mg
安果 標準品 :2540-82-1 250mg
Fosetyl-aluminum 標準品 :39148-24-8 250mg
Fosfomycin Calcium 標準品 :25992-22-7 100mg
唑磷 標準品 :98886-44-3 30mg
四氯苯酞標準品 : 87-41-2 100mg
呋線威 標準品 :65907-30-4 250mg
Gentamycin-2,5-sulfate hydrate 標準品 :1405-41-0 250mg
赤霉素 標準品 :28281 100mg
Gibberellin A3標準品 : 28281 250mg
在血清中除了包被外,一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調加樣量的準確性,例如規定為加樣一滴。此時應該使用相同口徑的滴管,保持準確的加樣姿勢,使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應力求準確。標本和結合物的稀釋液應按規定配制。加樣時應將液體加在孔底,避免加在孔壁上部,并注意不可出現氣泡。
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