操作步驟：
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。
3、樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
4、 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6、每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7、每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
操作注意事項：
1、試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶全溶解后再使用。
2、實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存。
3、濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4、嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5、所有液體組分使用前充分搖勻。
