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上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產品： 氣相色譜、液相色譜、氣質聯用儀、液質聯用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計 |
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使用7000D三重四極桿氣質 聯用系統測定化妝品中的十種揮發性 亞硝胺
2025-3-3 閱讀(34)
前言常見的亞硝胺類化合物 N-二甲基亞硝胺 (NDMA) 在各個領域都是引發高度關注的致癌物，其不僅在藥品中，而且在水中和食物(包括熏肉、烤肉、奶制品和蔬菜)中均有發現。《化妝品安全技術規范》(2015 年版)[1] 將亞硝胺類列為化妝品禁用組分，同時化妝品限用組分列表中要求：仲鏈烷胺最大含量 0.5% 且不和亞硝基化體系一起使用以避免形成亞硝胺，產品中亞硝胺最大含量 50 μg/kg。事實上，亞硝胺類物質的產生途徑除仲胺和亞硝化試劑的生產工藝原因以外，還可能來源于污染引入以及降解途徑。國家藥品監督管理局藥品審評中心于 2020 年發布的《化學藥物中亞硝胺類雜質研究技術指導原則(試行)》[2] 中強調“亞硝胺類雜質在人體中可接受限度較小，微量雜質的檢測和控制難度大”，應采取“避免為主，控制為輔的策略”。國家藥品監督管理局發布的《化妝品安全評估技術導則(2021 年版)》[3] 中也提及亞硝基化合物屬于強致癌物，需要進行相應的安全評估。總之，亞硝胺類化合物的存在較為普遍、容易被引入，并且毒性大、檢測難，開發相應的高效、高靈敏度檢測方法十分必要
《化妝品中 N-亞硝基二甲基胺等 10 種揮發性亞硝胺的測定氣相色譜-質譜/質譜法》(GB/T 29669-2013) [4] 中提出了利用 GC-MS/MS分析化妝品中 NDMA 等十種揮發性亞硝胺的方法，該方法對 NDMA的定量限為 10.0 mg/kg；而 2021 年公布的《食品安全國家標準 食品中 N-亞硝胺類化合物的測定(征求意見稿)》(GB 5009.26) 中第二法 QuEChERS-氣相色譜-質譜/質譜法的定量限為 1 μg/kg。相比較而言，后一種方法中使用的 Agilent Bond Elut EMR-Lipid增強型脂質去除產品使得樣品前處理更加簡便快速，并且結合安捷倫多模式進樣口 (MMI) 的溶劑放空模式，可進一步提升方法靈敏度。本應用簡報介紹了一種使用 Agilent 7000D 三重四極桿氣質聯用系統同時檢測化妝品中十種揮發性亞硝胺的方法。該方法使用Agilent Bond Elut EMR-Lipid 對洗發水樣品進行前處理，并結合多模式進樣口 (MMI)，實現了簡單、高靈敏度、準確可靠的亞硝胺定量分析(目標化合物及兩種內標的信息見表 1)。
實驗部分試劑和樣品亞硝胺標準品及內標均購自百靈威科技有限公司，乙腈(質譜純)購自 JT Baker。樣品購自本地超市。儀器和設備采用 Agilent 8890 氣相色譜系統和 7000D 三重四極桿氣質聯用系統，該儀器系統配備多模式進樣口 (MMI)、Agilent 7693A 自動液體進樣器和 MassHunter 數據處理工作平臺。目標物的采集離子對選擇和碰撞能量優化由 MassHunter Optimizer 自動優化程序完成。
標準溶液的配制將亞硝胺目標物標準品及其內標混合，使用乙腈配制成5.0–500 μg/L 的校準標樣，其中內標濃度為 100 μg/L，進樣至 GC-MS/MS 進行分析，并通過內標法進行定量。樣品前處理使用乙腈提取，并使用 EMR-Lipid 分散固相萃取進行凈化，詳細的樣品前處理流程見圖 1。簡言之，移取 1 g 樣品加入 5 mL 乙腈中振蕩提取；離心后取上層乙腈提取液加入 Agilent Bond ElutEMR-Lipid dSPE 增強型脂質去除凈化管(部件號 5982-1010)中；振蕩離心后，將上清液倒入 Agilent Bond Elut EMR-LipidPolish 反萃管(部件號 5982-0101)中，以去除多余水分并改善分析物分配；再次振蕩離心；然后取 1 mL 上清液過有機相濾膜后，進樣至 GC-MS/MS 進行分析。
氣相色譜條件色譜柱： Agilent DB-HeavyWAX 毛細管柱，30 m × 0.25 mm，0.25 µm(部件號 122-7132)進樣口襯管： 單錐不分流超高惰性襯管，帶玻璃毛(部件號 5190-2293)進樣體積： 1.0 μL(不分流模式)；5.0 μL(溶劑放空模式)載氣： 氦氣，恒定流速，1.0 mL/min進樣口溫度： 程序升溫，初始溫度 60 °C，保持 0.16 min，以 900 °C/min 的速率升至 220 °C進樣方式： 不分流模式、溶劑放空模式(詳細方法開發過程參見安捷倫應用簡報 5994-2222ZHCN[5])升溫程序： 40 °C 下保持 0.5 min，以 15 °C/min 的速率升至190 °C，再以 40 °C/min 的速率升至 260 °C，保持5 min
質譜條件溶劑延遲： 5.5 min離子化方式： EI離子源溫度： 250 °C四極桿溫度： 150 °C接口溫度： 250 °C檢測模式： MRM(離子對信息見表 2)定量方法： 內標法，各化合物定性定量離子對見表 2
