 |
上海斯邁歐分析儀器有限公司
主營產品： 氣相色譜、液相色譜、氣質聯用儀、液質聯用儀、原子吸收光譜儀、紫外分光光度計 |
聯系電話
18602175640
固相萃取結合高效液相色譜測定蘋果汁中苯并咪唑抗真菌劑
2023-3-13 閱讀(68)
摘要本應用報告優化了固相萃取（SPE）結合高效液相色譜（HPLC）萃取并定量測定蘋果汁中兩種抗真菌劑（多菌靈和噻菌靈）的方法。結果表明，采用安捷倫 Bond Elut SCX (60 mg,3 mL) 進行固相萃取，用 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 column (4.6 mm × 100 mm,3.5 µm) 進行 HPLC 分析，是萃取并分析這兩種化合物的組合。方法的回收率在 92.1到 99.4%之間，相對標準偏差 (RSD)低于 5%，檢出限為 4 µg/kg。
前言不同目的的農藥濫用已日益凸顯出威脅植物、動物及人類健康的嚴重環境問題。抗真菌劑就是這些農藥中到一類，主要用于防止真菌造成的農作物損害。抗真菌劑在全部所用農藥中約占 20-25%。苯并咪唑抗真菌劑在農業上是廣泛用于收獲前后控制廣譜病原體的系列化農藥。這類物質直接撒進土壤，或噴霧在農田里，并因此釋放到環境中。它們很容易通過根和葉滲入植物，也可以從農田中直接進入自然水源。大部分化合物在使用后都會在環境中長期存在，某些甚至存留數年。苯并咪唑系列中的兩個主要化合物是多菌靈和噻菌靈（表 1）。多菌靈對廣譜真菌病患具有預防和治療的雙重功能。它對人體、動物和植物有毒性，并于很長時間內存留在水中、廢水、土壤、農作物和食品中。噻菌靈用于控制水果和蔬菜病害，如霉菌、腐爛和枯萎，還被用作除蟲的獸藥。用安捷倫 Bond Elut SCX SPE 小柱從蘋果汁中提取抗真菌劑。本應用報告報導了對 SN/T 1753-2006 所述方法的應用和優化，以及對結果的確證。
實驗材料和化學試劑所有試劑和溶劑均為 HPLC 級或分析純。抗真菌劑標準品購自Sigma-Aldrich 公司（中國，上海）。蘋果汁（食品級）購自當地市場。 pH 至 3.0。用甲醇配制成儲備液 (0.1 mg/mL)，冷凍保存(–20 °C)。用甲醇稀釋儲備液以配制成工作溶液。工作溶液應每周配制，需 4 °C 條件下保存。固相萃取小柱為安捷倫 Bond Elut SCX 3 mL, 60 mg（部件號5982-3236）。分析采用 Agilent 1200 高效液相色譜儀，配備可變波長檢測器（VWD）。分析柱為 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C183.5 µm 100 mm × 2.1 mm 內徑（部件號 959793-902）。進行 HPLC分析前用安捷倫 0.45 µm 濾膜（部件號 5185-5836）過濾樣品溶液。
HPLC 條件色譜柱： ZORBAX Eclipse Plus C18 100 mm × 4.6 mm3.5 µm （部件號 959793-902）流速： 1.0 mL/min進樣體積： 20 µL檢測波長： 288 nm流動相： 磷酸鹽緩沖液-乙腈（73:27）樣品制備稱量 10 g 蘋果汁，用水稀釋至 100 mL，用玻璃棒攪動混合 1 分鐘。將稀釋后的樣品轉移到 250 mL 錐形燒瓶中，用 2 mol/L 氫氧化鈉溶液將 pH 調為 10。將樣品分成 2 或 3 份置于 50 mL 聚丙烯離心管中，于 4,000 rpm 離心 10 分鐘。將上清液合并到一個玻璃燒杯中。SPE 純化SPE 萃取步驟如圖 1 所示。安捷倫 Bond Elut SCX 小柱用 3 mL 甲醇活化，再用 3 mL 0.15 mol/L 氨水溶液靠重力流動沖洗（流速約1 mL/min）。
以 1 mL/min 左右的速度將 10 mL 上清液加載到 Bond Elut SCX小柱上。待樣品流出后，分別用 2 mL 0.15 mol/L 氨水溶液、2 mL 甲醇/0.15 mol/L 氨水溶液(3:7)溶液、2 mL 0.1 mol/L 鹽酸溶液和 3 mL 甲醇沖洗小柱。所有三個沖洗步驟均靠重力流動完成。丟棄所有洗脫液。用 2.0 kPa 負壓 1 分鐘抽干小柱。最后用 5 mL0.5 mol/L 氨甲醇溶液重力洗脫小柱。收集洗脫液，并用氮氣吹干。用流動相復溶殘渣，并定溶至 1 mL。再用 0.45 µm 濾膜過濾并分析。
結論安捷倫 Bond Elut SCX 提供了一種簡單而有效的小柱固相萃取方法，對蘋果汁中的抗真菌劑進行了純化和富集。用標準溶液測定的回收率和重現性，符合測定蘋果汁中抗真菌劑殘留量測定的中國國家標準。蘋果汁中的雜質很少，不會干擾任何抗真菌劑的分析。
