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所在地
上海市
更新時間:2023-12-08 15:30:13瀏覽次數(shù):876
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麻醉后的大鼠固定于腦立體定位儀,具體操作為大鼠上門齒卡入橫桿,調節(jié)旋鈕壓緊鼻桿;將耳桿插入大鼠耳道,平衡調節(jié)左、右耳桿,使大鼠兩耳間連線與耳桿在同一直線上,保證左、右耳桿的刻度位置相同后調節(jié)旋鈕鎖緊耳桿。大鼠固定完好的判斷標準:鼻對正中,頭部不動,提尾不掉,目測大腦放置水平(使顱骨水平)。
眼科剪縱向剪開大鼠頭部皮膚約3cm,用鑷子沿顱骨表面剝離骨膜結締組織并剪除,用無菌棉球蘸去浸出的血液,將顱骨表面清理干凈,暴露前后囟。
調節(jié)腦定位儀上橫縱坐標旋鈕使牙科微孔鉆位于前囟點上方并輕觸該點,以Bregma點作為三維坐標系的參考點(零點)。
根據(jù)注射位置的不同,及大鼠重量的不同,注射坐標不同。此處以普通SD大鼠(350±50g)側腦室注射為例,通過查詢腦立體定位圖譜確定需要定位的核團位置,確定坐標值,即ML值(X軸)、AP值(Y軸)、DV值(Z軸)。側腦室位置為前囟點旁開1.5mm,向后囟方向1.1mm ,深4.5mm(坐標即為±1.5,-1.1,-4.5)。調節(jié)X軸(1.5個單位)及Y軸(1.1個單位)旋鈕移動操作臂到坐標位置,使用微孔牙科鉆緩慢打孔。鉆孔另一種操作法為確定鉆孔位置后在該點蘸墨打點標記,后手持牙科鉆進行鉆孔。顱骨鉆穿時有明顯落空感,此時應小心操作避免傷及硬腦膜。
固定微量注射器,調節(jié)Z軸旋鈕(4.5個單位)使微量注射器針頭插入側腦室。進行緩慢注射,注射速度2 ul/min,注射劑量視具體實驗而定,一般在5ul左右。
注射完成后留針靜置10min以便藥液充分吸收。緩慢調節(jié)Z軸旋鈕向上拔出針頭,鉆孔處涂抹骨蠟。
縫合皮膚,完成腦定位注射。