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伊萊博生物科技（上海）有限公司
主營產(chǎn)品： 動物行為學(xué)檢測,大中小型動物實驗,細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù) |
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| 參考價 | ￥ 500 |
| 訂貨量 | 1盒 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 其他
- 所在地 上海市
更新時間：2023-10-30 15:49:07瀏覽次數(shù)：1709
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實驗過程
（1）標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：標(biāo)準(zhǔn)品按照說明書稀釋好五個梯度，各個梯度每孔加樣量都為50μL；
（2）加樣：分別設(shè)空白孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μL，然后再加待測樣品10μL。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻；
（3）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；
（4）配液洗滌：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用；小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；
（5）加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μL，空白孔除外；
（6）溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30min；
（7）洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30sec后棄去，如此重復(fù)5次，拍干；
（8）顯色：每孔先加入顯色劑A50μL，再加入顯色劑B50μL，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15min；
（9）終止：每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)；
（10）測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15min以內(nèi)進(jìn)行。
計算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為縱坐標(biāo)，OD值為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
