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伊萊博生物科技(上海)有限公司

主營產(chǎn)品: 動物行為學(xué)檢測,大中小型動物實驗,細胞培養(yǎng)服務(wù)

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穩(wěn)定細胞株的篩選
穩(wěn)定細胞株的篩選
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更新時間:2023-10-30 15:20:57瀏覽次數(shù):1362

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【簡單介紹】
穩(wěn)定細胞株的篩選:穩(wěn)定細胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到染色體中,用載體中所含的抗性標(biāo)志進行篩選,篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白,或者穩(wěn)定表達沉默特定基因的細胞株。

穩(wěn)定細胞株的篩選 服務(wù)介紹

穩(wěn)定細胞系是指將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上,載體被轉(zhuǎn)染到宿主細胞并整合到染色體中,用載體中所含的抗性標(biāo)志進行篩選,篩選得到可穩(wěn)定表達目的蛋白,或者穩(wěn)定表達沉默特定基因的細胞株。常用物理方法(電轉(zhuǎn))、化學(xué)方法(脂質(zhì)體等)、生物方法(病毒)。

穩(wěn)定細胞株的篩選  實驗原理

外源基因在細胞中的表達可分為兩大類,一類是瞬時表達,一類是穩(wěn)定表達(又叫表達)。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達到高水平的表達,但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩(wěn)定細胞株,一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對靶細胞進行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素(hygromycin)、新霉素(neomycin)和嘌呤霉素(puromycin)。

實驗流程:

1、載體構(gòu)建(表達質(zhì)粒載體、病毒載體);

2、轉(zhuǎn)染/感染;

3、目的蛋白初步檢測;

4、抗生素篩選;

5、目的蛋白再次檢測(定性/半定量);

6、單克隆細胞株穩(wěn)定性檢測。

客戶提供:培養(yǎng)好的細胞

公司提供:基本實驗步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果和穩(wěn)定表達細胞株

實驗周期:大約3-4月左右,具體需要根據(jù)細胞實驗內(nèi)容而定。



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