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甲基化檢測(BSP)
甲基化檢測(BSP)
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更新時間:2024-09-26 10:27:28瀏覽次數:4751

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【簡單介紹】
甲基化檢測(BSP):用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉化為niaomiding,而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR,在擴增過程中niaomiding全部轉化為胸腺嘧啶,然后對PCR產物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。

甲基化檢測(BSP)


甲基化檢測(BSP)原理

BSP技術的核心在于利用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA。在這個過程中,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)會被轉化為niaomiding(U),而甲基化的胞嘧啶則保持不變。隨后,通過PCR擴增處理后的DNA片段,在擴增過程中,niaomiding(U)會轉化為胸腺嘧啶(T)。最后,對PCR產物進行測序,通過比對測序結果中的胞嘧啶(C)和胸腺嘧啶(T)的比例,可以判斷原始DNA中CpG位點的甲基化狀態(tài)。

BSP技術步驟

  1. ?DNA提取與純化?:首先,從待測樣本中提取基因組DNA,并進行純化以去除雜質。

  2. ?亞硫酸氫鹽處理?:將純化后的DNA用亞硫酸氫鹽進行處理,使未甲基化的胞嘧啶轉化為niaomiding。

  3. ?PCR擴增?:設計特異性引物,對處理后的DNA進行PCR擴增,擴增過程中niaomiding轉化為胸腺嘧啶。

  4. ?克隆與測序?:將PCR產物克隆至載體中,挑取多個陽性克隆進行測序。測序結果將反映CpG位點的甲基化狀態(tài)。

  5. ?數據分析?:將測序結果與原始DNA序列進行比對,統(tǒng)計甲基化位點及數量,分析甲基化程度。

BSP技術特點

  1. ?高靈敏度?:BSP技術能夠檢測單個CpG位點的甲基化狀態(tài),具有jigao的靈敏度。

  2. ?單堿基分辨率?:該技術能夠實現單堿基水平的甲基化檢測,提供詳細的甲基化圖譜。

  3. ?定量分析能力?:通過統(tǒng)計測序結果中的C/T比例,可以計算出精確的甲基化程度百分比。

  4. ?實驗步驟復雜?:然而,BSP技術的實驗步驟相對較多,且成本較高,需要一定的實驗技能和經驗。




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