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African swine fever detection instrument operation method

　　非洲豬瘟檢測儀器操作方法

　　非洲豬瘟檢測儀器用于運行病毒檢測實驗，并對實驗數據進行分析;儀器既可在實驗室內操作，又可用于野外科學實驗，配合相應試劑，對取自待檢測樣本的分析物或其他分析物中的目標核酸進行快速、準確的定性檢測。

　　非洲豬瘟檢測儀器提前準備工作

　　1.請提前20分鐘從冰箱中取出**盒，平衡至室溫。

　　2.從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象;放置室溫，輕搖均勻，待結晶*溶解后再配置洗滌液。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

　　3.20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

　　非洲豬瘟檢測儀器實驗所需自備試驗器材：

　　1.檢測儀(450nm)

　　2.高精度加樣器及**頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

　　3.37℃恒溫箱或水浴鍋

　　4.蒸餾水或去離子水

　　非洲豬瘟快速檢測儀樣本處理及要求：

　　1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

　　2.血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或**鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

　　3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

　　4.非洲豬瘟檢測儀器培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測**內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋**懸液，**濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使**破壞并放出**內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

　　5.組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

　　非洲豬瘟檢測儀器操作方法

　　1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

　　2.設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;

　　3.待測樣本孔加待測樣本10μL，樣本稀釋液40μL;

　　4.非洲豬瘟檢測儀器隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

　　5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

　　6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。

　　7.每孔加入終止液50μL，15min內，在非洲豬瘟快速檢測儀450nm波長處測定各孔的OD值。