抗人生長因子（GF）抗體（HRP標記穩(wěn)定分泌抗人胰島素樣生長因子-1（hIGF-1）單克隆抗體（mAb）的雜交瘤細胞系,并對其分泌的mAb進行鑒定.方法:用純化后的hIGF-1重組蛋白免疫Balb/c小鼠,利用雜交瘤細胞融合技術制備抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鑒定mAb的特異性,用間接ELISA法檢測mAb腹水效價及mAb的親和力,雜交瘤細胞染色體分析,鑒定Ig亞類。
抗人生長因子（GF）抗體（HRP標記）說明書
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名 稱：抗人生長因子（GF）抗體（HRP標記）。
目 錄 號：YP100113
亞 型：IgG
緩 沖 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300。
免 疫 原：人生長因子（GF）。
制備方法：取健康BALB/C小鼠單抗腹水。
純化方法：親和純化。
標記方法：HRP偶聯(lián)標記
應用范圍：適用于ELISA、CLIA、WB、IHC、流式等實驗。
產(chǎn)品純度：不低于總蛋白的95%。
儲存方法：存放在-20℃。
注意事項：避免反復凍融。
有效期限：請您在管體注明有效期內(nèi)使用。
使用建議：本產(chǎn)品可以用于免疫學反應相關實驗，更多信息請咨詢技術人員。
抗人生長因子（GF）抗體（HRP標記）制備穩(wěn)定分泌抗人胰島素樣生長因子-1(hIGF-1)單克隆抗體(mAb)的雜交瘤細胞系,并對其分泌的mAb進行鑒定。方法:用純化后的hIGF-1重組蛋白免疫Balb/c小鼠,利用雜交瘤細胞融合技術制備抗hIGF-1的mAb,用Western blot法鑒定mAb的特異性,用間接ELISA法檢測mAb腹水效價及mAb的親和力,雜交瘤細胞染色體分析,鑒定Ig亞類。結果:獲得2株能穩(wěn)定分泌抗hIGF-1的mAb雜交瘤細胞系,Western blot分析顯示,該mAb能與具有生物學活性的成熟IGF-1蛋白結合。腹水mAb效價可達6×104。mAb相對親和力為2.1×109/mol～7.8×109/mol。2株單抗屬IgM亞類。染色體分析符合雜交瘤細胞特征。結論:成功制備出抗hIGF-1的2株mAb雜交瘤細胞,為進一步用于hIGF-1的臨床檢測和實驗研究創(chuàng)造了條件。制備抗人神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)的單克隆抗體(monoclonal antibody,mAb)，并對其生物學特性進行初步鑒定，為臨床上的預防和治療提供研究基礎。 [方法]以人胎盤提純的NGF作為免疫原，經(jīng)皮下、腹腔免疫6～8周雌性Balb/c小鼠。采用B淋巴細胞雜交瘤技術，將免疫鼠的脾臟細胞與同系動物的骨髓瘤細胞sp2/0進行融合。運用酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA)對雜交瘤細胞的培養(yǎng)上清進行特異性抗體的檢測。采用有限稀釋法對陽性分泌孔的雜交瘤細胞進行多次篩選和克隆化培養(yǎng)，獲取穩(wěn)定分泌特異性mAb的雜交瘤細胞株。取生長良好的雜交瘤進行染色體的數(shù)目分析。快速定性試紙法鑒定單抗的類型。體內(nèi)誘生腹水法進行單抗的制備。Protein G免疫親和層析法進行單抗的純化。以PC12為靶細胞，觀察和分析抗人NGF單克隆抗體對該細胞生長狀態(tài)的影響。 [結果]本研究獲得兩株可分泌特異性抗人NGF單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為1F6和5E4。其生物學特性：①兩株細胞的染色體數(shù)目均為100以上，提示為雜交瘤細胞；②快速定性試紙法鑒定兩株mAb均屬小鼠IgG1亞類和κ型；③體內(nèi)腹水誘生方法生產(chǎn)單克隆抗體，腹水形成的陽性率為90％，每只小鼠腹水的產(chǎn)量平均為8.0ml；④Protein G免疫親和層析法純化后，1F6和5E4雜交瘤細胞株的腹水抗體蛋白的含量分別為2.0mg／ml和1.5mg／ml；⑤ELISA法分析表明，腹水型單抗的效價均在1：1000以上；⑥經(jīng)*體外傳代培養(yǎng)，雜交瘤生長良好， 戎人禪經(jīng)全淺因廠‘萬6F少琪兌窟灰形功研御姿蘭勿筍舟蹬時研男 分泌抗體的性能穩(wěn)定;⑦實驗表明，IF6和5E4可降低NGF促進PC12細胞突起伸 長的作用。 抗人生長因子（GF）抗體（HRP標記）。[結論]本研究己制備兩株分泌抗人NGF功能性單克隆抗體的雜交瘤，該單 抗的研制為深入研究NGF的生物學功能提供了重要的手段。研制抗人NGF單克隆 抗體的關鍵環(huán)節(jié)是增強抗原的免疫原性、調(diào)整抗原的劑量、改變抗原的免疫途徑、 保持骨髓瘤細胞SpZ/0的活力、穩(wěn)定細胞融合溫度、避免細胞污染等。經(jīng)實驗表 明，IF6和5E4單克隆抗體可降低NGF促進PC12細胞突起伸長的作用，具有抗NGF 的特性。 NGF在神經(jīng)系統(tǒng)和非神經(jīng)系統(tǒng)中具有廣泛的生理作用，研制抗人NGF單克隆抗 體，在臨床上具有重要的應用價值。本文已在實驗室獲得抗人NGF單克隆抗體， 并具有較好的生物學活性，但在臨床上如何應用有待于進一步的深入研究。
