采用課題組已構建的攜帶人白介素2-人血清白蛋白融合蛋白（rhIL-2-HSA）基因的重組畢赤酵母Pichia pastoris GS115進行rhIL-2-HSA的分離純化研究.發酵上清液經超濾濃縮,Blue Sepharose親和層析,Octyl Sepharose疏水層析和DEAE Sepharose離子交換層析純化獲得較高純度的目的產物,SDS-PAGE檢測為單一條帶.Western Blo
人白介素2（IL-2）抗原純品說明書
首先感謝您選擇深圳市優品生物科技有限公司，我司為您提供優質的免疫學試劑，在您使用本產品前，請認真閱讀說明書，不清楚之處，請咨詢技術人員解答，這對您順利完成實驗很有幫助。
名 稱：人白介素2（IL-2）抗原純品。
目 錄 號：YP100003
濃 度：1mg/ml
緩 沖 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300、50%甘油。
制備方法： 大腸桿菌重組蛋白。
純化方法：親和純化。
應用范圍：用于細胞培養的刺激劑；用于ELISA、CLIA、WB、IHC等免疫檢測。
產品純度：不低于總蛋白的90%。
儲存方法：存放在-20℃。
注意事項：避免反復凍融。
有效期限：請您在管體注明有效期內使用。
使用建議：本產品可以用于細胞水平、動物水平、蛋白水平的免疫學反應相關實驗。
在本實驗室之前的研究中,利用畢赤酵母對人白介素-2(IL-2)和人血清白蛋白(HSA)融合蛋白進行表達,分別將IL-2連在HSA的N-端(IL-2-HSA)和C-端(HSA-IL-2)得到的融合蛋白都具有良好的生物學活性,其半衰期也由IL-2單體的6.9 min延長至13.24 h.但在研究中發現,畢赤酵母在表達HSA融合蛋白時存在蛋白降解,產物不均一和過度糖基化等現象,導致分離純化困難,活性下降以及半衰期縮短等問題,這些不利因素限制了畢赤酵母在表達IL-2融合蛋白中的應用.目前中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary,CHO)已成功應用于多種藥物蛋白的表達,因此本研究將IL-2和HSA的融合蛋白在CHO細胞中進行表達,對篩選得到的工程細胞株的生長狀態和蛋白表達進行了檢測,同時對融合蛋白的分離純化策略和生物活性進行了分析.本研究利用基因工程技術構建兩種不同連接方式的融合蛋白表達質粒,并通過電轉染的方法分別轉入CHO細胞中,經過四次克隆篩選和搖瓶終篩獲得了高效表達HSA-IL-2融合蛋白的細胞株CHO/p MH3-HSA-IL-2/9和表達IL-2-HSA融合蛋白的細胞株CHO/p MH3-IL-2-HSA/8.進行Western blot檢測后發現兩種融合蛋白都具有HSA和IL-2雙重免疫原性,CTLL-2/MTT法檢測發現,篩選得到的細胞株分泌表達的融合蛋白都具有一定的生物活性.對篩選得到的細胞株進行3 L搖瓶流加培養,CHO/p M
在本實驗室之前的研究中,利用畢赤酵母對人白介素-2(IL-2)和人血清白蛋白(HSA)融合蛋白進行表達,分別將IL-2連在HSA的N-端(IL-2-HSA)和C-端(HSA-IL-2)得到的融合蛋白都具有良好的生物學活性,其半衰期也由IL-2單體的6.9 min延長至13.24 h.但在研究中發現,畢赤酵母在表達HSA融合蛋白時存在蛋白降解,產物不均一和過度糖基化等現象,導致分離純化困難,活性下降以及半衰期縮短等問題,這些不利因素限制了畢赤酵母在表達IL-2融合蛋白中的應用.目前中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary,CHO)已成功應用于多種藥物蛋白的表達,因此本研究將IL-2和HSA的融合蛋白在CHO細胞中進行表達,對篩選得到的工程細胞株的生長狀態和蛋白表達進行了檢測,同時對融合蛋白的分離純化策略和生物活性進行了分析.本研究利用基因工程技術構建兩種不同連接方式的融合蛋白表達質粒,并通過電轉染的方法分別轉入CHO細胞中,經過四次克隆篩選和搖瓶終篩獲得了高效表達HSA-IL-2融合蛋白的細胞株CHO/p MH3-HSA-IL-2/9和表達IL-2-HSA融合蛋白的細胞株CHO/p MH3-IL-2-HSA/8.進行Western blot檢測后發現兩種融合蛋白都具有HSA和IL-2雙重免疫原性,CTLL-2/MTT法檢測發現,篩選得到的細胞株分泌表達的融合蛋白都具有一定的生物活性.對篩選得到的細胞株進行3 L搖瓶流加培養,CHO/p M
