制備特異性高的抗人Ig G和抗人Ig M單克隆抗體,并應(yīng)用于臨床血清學(xué)檢測試劑盒,為其提供優(yōu)質(zhì)的二抗.方法:以人Ig G和Ig M為抗原,免疫BALB/c小鼠,通過傳統(tǒng)雜交瘤融合和篩選技術(shù)制備抗人Ig G和抗人Ig M單克隆抗體;經(jīng)體內(nèi)誘生法制備腹水并純化;采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）和Western印跡進(jìn)行交叉篩選和特異性鑒定,并對篩選出的單抗進(jìn)行辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記,再與市售的檢
抗大鼠免疫球蛋白M（IgM）抗體說明書
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名 稱：抗大鼠免疫球蛋白M（IgM）抗體。
克 隆 號：YIG232。
目 錄 號：YP826512。
亞 型：IgG。
緩 沖 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300。
免 疫 原：大鼠免疫球蛋白M 。
制備方法：取健康BALB/C小鼠單抗腹水。
純化方法：親和純化。
應(yīng)用范圍：抗體針對的是大鼠免疫球蛋白M表位，適用于ELISA、CLIA、 WB、IHC等免疫實驗。
產(chǎn)品純度：不低于總蛋白的95%。
儲存方法：存放在-20℃。
注意事項：避免反復(fù)凍融。
有效期限：請您在管體注明有效期內(nèi)使用。
使用建議：本產(chǎn)品可以用于大鼠免疫球蛋白M的免疫學(xué)反應(yīng)相關(guān)實驗。
應(yīng)用細(xì)胞工程技術(shù)研制大菱鲆免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)的單克隆抗體并分析其免疫學(xué)特性。小鼠骨髓瘤細(xì)胞NS0與經(jīng)IgM免疫的BALB/C小鼠脾細(xì)胞融合,經(jīng)過反復(fù)有限稀釋法克隆,篩選獲得4株抗大菱鲆IgM的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株,分別為B1D1、D5C2、E1B2和F4A1。經(jīng)小鼠腹水?dāng)U大生產(chǎn)后,單抗效價為1∶1.024×106檢測靈敏度為32 ng/mL。Western blot分析表明,獲得的單抗與IgM重鏈區(qū)特異性結(jié)合。交叉結(jié)果顯示,單抗與大菱鲆血清呈強(qiáng)陽性反應(yīng),與褐牙鲆、紅鰭東方鲀、許氏平鲉、六線魚、鱸魚均呈微弱陽性反應(yīng),而與半滑舌鰨、鯉魚、鯽魚、草魚、鳙魚的血清無交叉反應(yīng)。本研究制備的大菱鲆IgM單克隆抗體效價高、靈敏度高、特異性強(qiáng),適合用于大菱鲆免疫學(xué)相關(guān)研究和生產(chǎn)實際應(yīng)用。制備特異性高的抗人Ig G和抗人Ig M單克隆抗體,并應(yīng)用于臨床血清學(xué)檢測試劑盒,為其提供優(yōu)質(zhì)的二抗.方法:以人Ig G和Ig M為抗原,免疫BALB/c小鼠,通過傳統(tǒng)雜交瘤融合和篩選技術(shù)制備抗人Ig G和抗人Ig M單克隆抗體;經(jīng)體內(nèi)誘生法制備腹水并純化;采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)和Western印跡進(jìn)行交叉篩選和特異性鑒定,并對篩選出的單抗進(jìn)行辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記,再與市售的檢測病原微生物抗體試劑盒中對應(yīng)的HRP標(biāo)記的二抗(抗人Ig G和抗人Ig M)做對比分析.結(jié)果:篩選到2株可穩(wěn)定分泌抗人Ig G單抗和2株抗人Ig M單抗,經(jīng)交叉反應(yīng),Western印跡及對比實驗分析,證明這4株單抗效價高,特異性好,比臨床試劑盒中的酶標(biāo)二抗特異性強(qiáng),敏感度高.結(jié)論:獲得4株特異性強(qiáng),敏感度高的抗人Ig G和抗人Ig M單克隆抗體,可為各種病原微生物血清學(xué)的檢測提供二抗試劑,具有良好的應(yīng)用價值.
