人基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒適用于血清、血漿、唾液、尿液、細胞培養上清等多個樣本。遵循一定的操作事項是確定其使用效果的基本要求。
人基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒使用方法:
1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);每孔再加入酶標工作液100μL;空白對照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次。
6、顯色:每孔先加入顯色劑A液50μL,再加入顯色劑B液50μL,37℃避光顯色15min。
7、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應。
8、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
9、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

人基質金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒注意事項:
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
4、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
5、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
6、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
7、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。