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K. lactis 蛋白表達試劑盒 .
SacII.
K. lactis GG799 感受態細胞
酵母碳基礎培養基
K. lactis GG799 感受態細胞
酵母碳基礎培養基
特性
可克隆和表達對大腸桿菌有毒性的基因
可同時表達多個基因
無需昂貴的抗生素或甲醇
易操作的實驗步驟，適用于無酵母表達經驗者
有吸引力的商業shouquan
有吸引力的商業shouquan
概述
K. lactis 蛋白表達試劑盒提供了一種在乳酸克魯維酵母（Kluyveromyces lactis）中表達目的基因的簡便方法。目的基因克隆到 pKLAC 系列整合載體中，既可表達胞內蛋白，亦可表達分泌型蛋白。與其它酵母和細菌表達系統相比，K. lactis 蛋白表達系統有著諸多優點。首先，乳酸克魯維酵母具有高培養密度及整合多拷貝質粒的能力，使其可成功制備大量的高表達蛋白質；其次，pKLAC1 系列載體使用強 LAC4 啟動子，該啟動子經修飾，在大腸桿菌中無背景表達，因此，可用于對大腸桿菌有毒性的基因表達；再有，試劑盒提供高效轉化的 K. lactis 感受態細胞，使得該系統適用于需要大量轉化子的實驗，比如利用 cDNA 文庫進行表達克隆；另外，酵母轉化子的篩選不需要昂貴的抗生素，培養基中也不需要甲醇；最后，K. lactis 細胞表達的蛋白質可以進行翻譯后修飾，因而可成為細菌表達系統的有用替代。
pKLAC2 屬于通用表達載體。利用這些載體既可使重組蛋白在細胞內表達，也能通過與
K. lactis α-factor 的融合實現分泌表達。pKLAC2 的多克隆位點與 NEB 其它表達系統相兼容。GG799 是 K. lactis 蛋白表達試劑盒中提供的基礎菌株。其特點是細胞生長密度與異源蛋白表達效率jigaoGG799 細胞未經遺傳修飾。
蛋白質的分泌過程。在細胞核中，整合表達載體編碼了一個含有 ɑ-MF 結構域（藍色）和目的蛋白（黑色）的融合蛋白。融合蛋白表達后，位于 ɑ-MF 上的信號肽就會指導融合蛋白轉運至內質網（ER），信號肽即被信號肽酶（SP）切除。融合蛋白質轉運至高爾基體，Kex 蛋白酶在此將 α-MF 結構域切除。隨后，目的蛋白質被分泌到細胞外。
K. lactis 的蛋白表達。SDS-PAGE 電泳分離檢測分泌性表達的重組麥芽糖結合蛋白（MBP），菌體生長在富含蛋白胨（peptone）的培養基中，直接上樣檢測。考馬斯亮藍染色鑒定。泳道 1：蛋白分子量 Marker；泳道 2：野生型 K. lactis 細胞培養液（15 μl）；泳道 3：整合有大腸桿菌 malE 基因表達框的 K. lactis 細胞培養液（15 μl）。
K. lactis 蛋白表達試劑盒包括
- pKLAC2 載體和 pKLAC1-malE 對照質粒
- SacII
- 整合測序引物套裝
- K. lactis GG799 感受態細胞和轉化試劑
- 酵母碳基礎培養基與乙酰胺溶液
- 酵母碳基礎培養基與乙酰胺溶液
