通過對受體序列的深入分析，揭示復(fù)雜的免疫系統(tǒng)

• 對 B 細(xì)胞受體（BCR）和 T 細(xì)胞受體（TCR）進(jìn)行富集和測序• 制備 B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞的全長免疫基因組庫• 使用weiyi分子標(biāo)簽序列（UMI）準(zhǔn)確定量轉(zhuǎn)錄本• 使用用于生物信息流程（教程）的開源軟件工具——pRESTO 分析數(shù)據(jù)

產(chǎn)品說明

概述：

免疫組庫測序常常用來分析當(dāng)下的和過去的免疫應(yīng)答反應(yīng)。應(yīng)用領(lǐng)域包括：自身免疫性疾病的表征、腫瘤學(xué)、傳染病中和抗體的發(fā)現(xiàn)、腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞以及用作研究殘留病的工具。二代測序（NGS）平臺在讀長和通量方面的zuixin進(jìn)展促進(jìn)了免疫組庫測序的發(fā)展。

NEBNext® 免疫測序試劑盒（人）通過對 B 細(xì)胞和 T 細(xì)胞全長免疫組庫分析，能獲得體細(xì)胞的所有突變信息。該試劑盒提供引物模塊，可用于分析完整的 V、D、J 區(qū)域和 IgM、IgD、IgG、IgA、IgE 亞類，并分析 BCR 輕鏈、BCR 重鏈、TCRα 鏈和 TCRβ 鏈。該試劑盒還提供weiyi分子標(biāo)簽序列（UMI），將來源于同一個分子的 PCR 產(chǎn)物組成共有序列，以便提高測序準(zhǔn)確性，消除 PCR 偏差。Galaxy 平臺提供一個開源軟件工具——pRESTO，用于在本地或云端開展chaoqiang生物信息分析。為了確保不熟悉 Galaxy 平臺的用戶能成功使用分析軟件，pRESTO 提供教學(xué)教程。 抗體和 TCR 結(jié)構(gòu)的簡化示意圖：  免疫組建庫流程: 產(chǎn)品描述：使用weiyi分子標(biāo)簽序列（UMI）實(shí)現(xiàn)克隆型的精準(zhǔn)檢測。比較克隆型頻率：使用 10 ng 和 100 ng T 細(xì)胞總 RNA 制備人類 TCR 文庫，在有或沒有 UMI 情況下分別建庫。根據(jù)有 UMI 的測序結(jié)果，對個高表達(dá)克隆型進(jìn)行排序。重復(fù)建庫，克隆型頻率重疊繪制于圖中。每個條形或圓點(diǎn)代表一個克隆，該克隆經(jīng)過總讀長分析或使用 UMI 過濾。使用 UMI 可對原始樣本中的起始 RNA 分子進(jìn)行juedui定量。當(dāng)將克隆按照富集度從高到底進(jìn)行排序，沒有 UMI 的數(shù)據(jù)會導(dǎo)致 PCR 或測序擴(kuò)增的偏差，從而誤導(dǎo)樣本中克隆型頻率的分析。UMI 的使用通過對起始樣本中 RNA 的juedui定量來校正偏差。使用 UMI 也可以在重復(fù)本之間實(shí)現(xiàn)更好的相關(guān)性，尤其是起始量較低時。各個文庫向下抽樣 500,000 reads。 使用 NEBNext 免疫測序試劑盒（人），能夠在同一管中制備人 BCR 和 TCR 文庫。分別使用 1 μg、100 ng 和 10 ng 人 PBMC 總 RNA（Takara Bio #636592）制備人 BCR+TCR 文庫，每個起始量都做有平行實(shí)驗。所有文庫向下抽樣 950,000 reads。使用 pRESTO 工具完成 reads 過濾、序列組裝和基于 UMIs 組成共有序列。使用 MiGMAP 鑒別 V、D 和 J 區(qū)域。圖（A）表示每個人類 PBMC 總 RNA 起始樣本檢測到的克隆型數(shù)量。圖（B）表示各文庫中 B 細(xì)胞鏈和 T 細(xì)胞鏈所占百分比。