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NEBNext® Ultra™ II DNA PCR-Free 文庫制備試劑盒
NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶
NEBNext® Ultra™ II FS DNA PCR-free 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶（含純化磁珠）
產品特點
·起始量范圍廣：250 ng 至 1,000 ng 的起始 DNA 均可制備高質量文庫，且無需擴增步驟
·更高的文庫產量，獲得更多有用信息
·提高文庫均一性，進而提高測序質量
·不同類型的起始樣本，均可制備 PCR-free 文庫
·通過優化的 PCR-free 實驗流程，減少手動操作時間，并可與自動化兼容
·配合使用 NEBNext 多樣本接頭引物試劑盒 1（Unique 雙端 Index 引物，UMI 接頭，適用于 DNA）（NEB #E7395）或其它具有3' T 突出的適用于 Illumina 平臺的接頭
·試劑盒提供 SPRIselect® 磁珠，可靈活方便地進行片段篩選和純化
·也可提供不含樣品純化磁珠的 NEBNext Ultra II DNA PCR-Free 文庫制備試劑盒
產品描述
沒有偏差！基于簡化可靠的 Ultra II 流程，適用于 Illumina® 測序平臺的本試劑盒可為 DNA-seq 提供無需擴增的文庫制備流程。即使 DNA 起始量低至 250 ng，也可獲得高質量、高產量的文庫，而無需擔憂 PCR 偏差。
NEBNext Ultra II DNA PCR-Free 文庫制備試劑盒包含不同起始量、已打斷的 DNA 文庫制備所需的所有酶和緩沖液，以便在 Illumina 平臺上進行二代測序，且不需要擴增步驟。快速、用戶友好的流程僅需最少的手動操作時間，在無需 PCR 的情況下，就可獲得優異的文庫產量和 GC 覆蓋度。
為方便起見，該試劑盒還提供 NEBNext 樣品純化磁珠（Beckman Coulter 的 SPRIselect 磁珠），可用于片段篩選和酶反應純化步驟。
注意：如果您的起始 DNA 尚未打斷，我們推薦您使用 NEBNext Ultra II FS DNA PCR-Free 文庫制備試劑盒 - 含片段化酶，該試劑盒將 DNA 片段化、末端修復和加 dA 尾優化到同一管中，無需純化或移液。
產品描述：
使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒，能獲得更高的文庫產量。
A.以 1 µg NA19240 基因組 DNA（Coriell Institute）為起始樣本，使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒和 Illumina TruSeq® PCR-free 文庫制備試劑盒分別制備 PCR-free 文庫，350 bp 插入片段作為篩選標準。
B.分別使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒和 Roche Sequencing Kapa HyperPrep 文庫制備試劑盒，結合 Covaris 打斷，制備 150 - 200 bp 插入片段的文庫，不進行片段篩選。根據生產商推薦方法，NEBNext、Illumina 和 Kapa 試劑盒分別使用了 NEBNext 多樣本接頭引物試劑盒 1（Unique 雙端 Index 引物，UMI 接頭，適用于 DNA）、IDT for Illumina（TruSeq DNA UD Indexes）和 Kapa Dual-Indexed Adaptors。
使用 NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒，實現人類基因組均一覆蓋。相較于 Illumina DNA PCR-free 文庫制備試劑盒，NEBNext Ultra II DNA PCR-free 文庫制備試劑盒可實現更高的基因組覆蓋度。根據生產商推薦方法，以 250 ng NA19240 基因組 DNA 為起始樣本制備文庫，使用 NovaSeq 6000 S4 v1.5 flow cell（PE 2 x 150 bp）測序。Reads 去接頭（fastp 0.20.0）后比對至端粒到端粒 chm13 參考基因組（draft 1，bwa-mem 0.7.17），并標記重復（samblaster 0.1.24）。從每個 bam 中隨機抽取 2.8 B Reads（sambamba view -s 0.6.8）。使用 mosdepth（v0.3.1，-F 772）評估過濾水平和初級覆蓋度，并繪制常染色體或線粒體基因組圖。圖中標示出了預期覆蓋度（num_reads*read length/genome size）
