活性氧（ROS）是含有氧的化學活性分子。實例包括超氧化物，羥基自由基，單線態(tài)氧和過氧化物。由于存在不配對的價殼電子，ROS具有高反應活性。ROS是氧正常代謝的天然副產(chǎn)物，在細胞信號傳導和體內(nèi)平衡中起重要作用。但是，在環(huán)境壓力（例如紫外線或熱暴露）期間，ROS水平可能會急劇增加。這可能會嚴重損壞細胞結構。累積地，這稱為氧化應激。MitoROS™580是一種超氧化物敏感性染料，在加載到活細胞中時位于線粒體中。MitoROS™580被超氧化物氧化會產(chǎn)生紅色熒光。MitoROS™580可用于通過熒光顯微鏡或熒光流式細胞儀監(jiān)測線粒體中的超氧化物。MitoROS™580試劑滲透到活細胞中，并選擇性地靶向線粒體。它會被超氧化物迅速氧化。它不太可能被其他活性氧（ROS）和活性氮（RNS）氧化。氧化產(chǎn)物在細胞中是高度熒光的。MitoROS™580提供了一種有價值的工具，可用于研究各種病理學中的氧化應激。

重要說明
該協(xié)議僅提供指南，應根據(jù)您的特定需求進行修改。在制備MitoROS™580工作溶液之前，請根據(jù)需要處理細胞。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，制備后應儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。

1. MitoROS™580儲備溶液（1000X）
向MitoROS™580小瓶中添加13 µL DMSO，并充分混合。注意：未使用的儲備溶液可以在-20 ^o C 下保存  。避光。

準備工作溶液

MitoROS™580工作溶液（2X）：
用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）將DMSO儲備溶液稀釋到Hanks溶液中，制成2X工作溶液。 注意： 2X MitoROS™580工作溶液不穩(wěn)定，請立即使用。

程序

1. 根據(jù)需要處理細胞。
    
2. 在37°C避光的條件下，用等體積的2X MitoROS™580工作溶液孵育細胞（例如100 µL /孔在96孔板上）。 注意： MitoROS™580的zui終細胞濃度不應超過1X。濃度超過1 X會產(chǎn)生細胞毒性作用，包括改變線粒體形態(tài)以及熒光重新分布到細胞核和胞質溶膠。 注意：  不同的細胞對MitoROS™580的反應不同，請相應地調(diào)整工作濃度。
    
3. 輕輕清洗細胞三遍，并用HHBS緩沖液替換。
    
4. 用適當?shù)臒晒鈨x器（例如熒光顯微鏡，流式細胞儀）分析細胞，Ex / Em = 510/580 nm。

   16053	ROS Brite™活性氧熒光探針DHCF	ROS Brite™ DHCF	1 mg
   16055	Cell Meter™線粒體羥基自由基檢測試劑盒	Cell Meter™ Mitochondrial Hydroxyl Radical Detection Kit *Red Fluorescence*	200 Tests
   16060	Cell Meter™熒光法線粒體超氧化物活性檢測試劑盒	Cell Meter™ Fluorimetric Mitochondrial Superoxide Activity Assay Kit *Green Fluorescence*	200 Tests