氨基酸，離子，代謝物和其他小分子的分析經(jīng)常受生物流體，細(xì)胞和組織裂解物中存在的脂質(zhì)，蛋白質(zhì)和酶的干擾而阻礙。因此，在生物樣品分析之前，脫蛋白是許多程序中的必要步驟。AAT Bioquest的脫蛋白樣品制備試劑盒提供了一種快速去除生物樣品中蛋白質(zhì)的方法。通過(guò)使用三氯yi酸（TCA）沉淀蛋白質(zhì)。除去沉淀的蛋白質(zhì)后，用中和溶液中和樣品的pH。基于TCA的脫蛋白已成功且廣泛用于樣品制備之前，對(duì)小分子（例如糖原，ATP，cAMP，guguanggantai和抗氧化劑）進(jìn)行定量。該試劑盒中提供的TCA方法也可用于大規(guī)模去除蛋白質(zhì)。使用該試劑盒制備的生物樣品可以直接用于各種生化分析。

重要說(shuō)明
使用前，將套件組件放在冰上。

程序

蛋白質(zhì)沉淀：

1. 均質(zhì)和離心后，制備蛋白濃度小于50 mg / mL的澄清溶液樣品。將蛋白質(zhì)樣品放在冰上。注意：高蛋白濃度的樣品可能需要稀釋。
   

2. 向100 µL蛋白質(zhì)樣品中加入10 µL冷的TCA（組分A）并短暫渦旋以充分混合。
   

3. 將樣品在冰上放置10分鐘。以12,000 rpm離心5分鐘。將上清液（去蛋白的樣品）轉(zhuǎn)移到另一個(gè)試管中。注意：建議中和TCA中的樣品，并立即用于相關(guān)測(cè)定。但是，TCA中的脫蛋白樣品可以在-70°C下保存長(zhǎng)達(dá)一個(gè)月。

TCA中和：

1. 為了中和過(guò)量的三氯yi酸，在收集的上清液中加入10 µL的冷中和溶液（組分B）并短暫渦旋以充分混合。
   

2. 將樣品在冰上放置5分鐘。現(xiàn)在將樣品脫蛋白并中和。
   

3. （可選）讀取280 nm（OD）處的吸光度，以檢查樣品是否脫蛋白。

數(shù)據(jù)分析

添加TCA和中和溶液（總體積約120 µL）可稀釋原始樣品（初始樣品體積為100 µL）中的蛋白質(zhì)濃度。稀釋系數(shù)可以通過(guò)以下公式計(jì)算：

原始蛋白質(zhì)濃度％=（初始樣品體積）/（初始樣品體積+ TCA體積+中和溶液體積）