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自噬是進化上保守的降解過程，其靶向長壽的蛋白質(zhì)，細(xì)胞器和其他細(xì)胞質(zhì)成分，通過溶酶體途徑進行降解。自噬途徑與泛素-蛋白酶體途徑的作用互補，泛素-蛋白酶體途徑通常降解短壽命的蛋白質(zhì)。自噬途徑的激活對于多種細(xì)胞作用是必需的，包括饑餓期間的存活，細(xì)胞內(nèi)組分的清除，發(fā)育和免疫。在沒有壓力的情況下，自噬起到了保持家務(wù)的作用，去除受損的細(xì)胞器和細(xì)胞成分，從而防止細(xì)胞毒性作用。自噬的減少和缺陷與多種疾病有關(guān)，例如亨廷頓病，阿爾茨海默氏病和帕金森病。就癌癥的發(fā)展而言，自噬似乎起著多種作用。某些自噬蛋白（例如Beclin-1和Bif-1）的表達(dá)降低或缺失，會增加小鼠的腫瘤易感性，而這些蛋白的過表達(dá)則會抑制癌細(xì)胞的生長。但是，自噬對于實體營養(yǎng)缺乏和低氧的核心內(nèi)癌細(xì)胞的生存至關(guān)重要。Cell Meter™自噬試劑盒采用Autophagy Blue™作為特定的自噬標(biāo)記物來分析自噬活性。該測定法經(jīng)過優(yōu)化，可直接檢測分離和附著細(xì)胞中的自噬。該試劑盒提供了測定規(guī)程的所有基本組件。Cell Meter™自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡，熒光酶標(biāo)儀。增加了小鼠的腫瘤易感性，而這些蛋白的過度表達(dá)可以抑制癌細(xì)胞的生長。但是，自噬對于實體營養(yǎng)缺乏和低氧的核心內(nèi)癌細(xì)胞的生存至關(guān)重要。Cell Meter™自噬試劑盒采用Autophagy Blue™作為特定的自噬標(biāo)記物來分析自噬活性。該測定法經(jīng)過優(yōu)化，可直接檢測分離和附著細(xì)胞中的自噬。該試劑盒提供了測定規(guī)程的所有基本組件。Cell Meter™自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡，熒光酶標(biāo)儀。增加了小鼠的腫瘤易感性，而這些蛋白的過度表達(dá)可以抑制癌細(xì)胞的生長。但是，自噬對于實體營養(yǎng)缺乏和低氧的核心內(nèi)癌細(xì)胞的生存至關(guān)重要。Cell Meter™自噬試劑盒采用Autophagy Blue™作為特定的自噬標(biāo)記物來分析自噬活性。該測定法經(jīng)過優(yōu)化，可直接檢測分離和附著細(xì)胞中的自噬。該試劑盒提供了測定規(guī)程的所有基本組件。Cell Meter™自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡，熒光酶標(biāo)儀。Cell Meter™自噬試劑盒采用Autophagy Blue™作為特定的自噬標(biāo)記物來分析自噬活性。該測定法經(jīng)過優(yōu)化，可直接檢測分離和附著細(xì)胞中的自噬。該試劑盒提供了測定規(guī)程的所有基本組件。Cell Meter™自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡，熒光酶標(biāo)儀。Cell Meter™自噬試劑盒采用Autophagy Blue™作為特定的自噬標(biāo)記物來分析自噬活性。該測定法經(jīng)過優(yōu)化，可直接檢測分離和附著細(xì)胞中的自噬。該試劑盒提供了測定規(guī)程的所有基本組件。Cell Meter™自噬試劑盒適用于熒光顯微鏡，熒光酶標(biāo)儀。
| 熒光顯微鏡 | |
| 激發(fā) | DAPI頻道 |
| 發(fā)射 | DAPI頻道 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 330納米 |
| 發(fā)射 | 520納米 |
| 隔斷 | 475納米 |
| 推薦板 | 黑墻/透明底 |
| 儀器規(guī)格 | 底讀模式 |
| 組件A：500X自噬Blue™ | 1小瓶（50 µL） |
| 組分B：污漬緩沖液 | 1瓶（25毫升） |
| 組分C：洗滌緩沖液 | 1瓶（100毫升） |
- 用您的測試化合物以1-2×10 4個細(xì)胞/孔的密度準(zhǔn)備細(xì)胞
- 添加Autophagy Blue™工作解決方案
- 在37°C孵育15-60分鐘
- 用洗滌緩沖液洗滌細(xì)胞
- 使用DAPI濾光片組監(jiān)控在Ex / Em = 330/520 nm（截止= 475 nm）處的熒光增加
重要說明
開始實驗前，請在室溫下解凍所有組分。
將20μL500X Autophagy Blue™（組分A）添加到10 mL染色緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成Autophagy Blue™工作溶液。避光。注意： 20μL500X Autophagy Blue™（組分A）足以容納一個96孔板。
程序
- 根據(jù)特定的誘導(dǎo)方案將細(xì)胞培養(yǎng)至自噬誘導(dǎo)的密度（約1-2 x 10 4個細(xì)胞/孔/ 96孔板）。同時，在每種標(biāo)記條件下，以與誘導(dǎo)種群相同的密度培養(yǎng)非誘導(dǎo)的陰性對照細(xì)胞種群。
- 除去培養(yǎng)基。
- 在每個孔中加入100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的Autophagy Blue™工作溶液。
- 將細(xì)胞在37°C，5％CO 2的培養(yǎng)箱中孵育15至60分鐘。注意： 適當(dāng)?shù)姆跤龝r間取決于所用的單個細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
- 用洗滌緩沖液（組分C）洗滌細(xì)胞3-4次，然后向每個孔中添加100 µL洗滌緩沖液（組分C）。 注意：建議增加標(biāo)記濃度或孵育時間，以使染料在細(xì)胞未充分染色的情況下積累。
- 用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 330/520 nm（Cutoff = 475 nm）上監(jiān)測熒光強度，該熒光顯微鏡配有DAPI濾光片組。
23001 Cell Explorer™細(xì)胞自噬檢測熒光成像試劑盒 Cell Explorer™ Autophagy Fluorescence Imaging Kit 200 Tests 23002 Cell Meter™細(xì)胞自噬檢測試劑盒*綠色熒光* Cell Meter™ Autophagy Assay Kit *Green Fluorescence* 200 Tests
