Power Styramide™信號放大（PSA™）系統(tǒng)是zui靈敏的方法之一，可以檢測細胞和組織中極低豐度的靶標，其熒光信號強度比廣泛使用的tyramide（TSA）試劑高10-50倍。與具有更高熒光強度，更高的光穩(wěn)定性和增強的水溶性的我們的iFluor™染料結合使用，iFluor™染料標記的Styramide™共軛物可以產生比標準ICC /顯著更高的精度和靈敏度（超過100倍）的熒光信號。 IF / IHC。PSA利用辣根過氧化物酶（HRP）的催化活性原位共價沉積熒光團。PSA自由基的反應性比酪酰胺自由基高得多，這使PSA系統(tǒng)比傳統(tǒng)的TSA試劑更快，更耐用，更靈敏。與酪酰胺試劑相比，Styramide™共軛物具有以更高效率標記靶標的能力，因此產生明顯更高的熒光信號。與標準直接偶聯(lián)法或酪酰胺擴增相比，與相同水平的敏感性相比，Styramide™偶聯(lián)物還可以顯著減少一級抗體的消耗。iFluor™350苯乙烯酰胺是Alexa Fluor 350酪酰胺或其他光譜相似的熒光酪酰胺偶聯(lián)物或TSA試劑的優(yōu)良替代品。與標準直接偶聯(lián)法或酪酰胺擴增相比，與相同水平的敏感性相比，Styramide™偶聯(lián)物還可以顯著減少一級抗體的消耗。iFluor™350苯乙烯酰胺是Alexa Fluor 350酪酰胺或其他光譜相似的熒光酪酰胺偶聯(lián)物或TSA試劑的優(yōu)良替代品。與標準直接偶聯(lián)法或酪酰胺擴增相比，與相同水平的敏感性相比，Styramide™偶聯(lián)物還可以顯著減少一級抗體的消耗。iFluor™350苯乙烯酰胺是Alexa Fluor 350酪酰胺或其他光譜相似的熒光酪酰胺偶聯(lián)物或TSA試劑的優(yōu)良替代品。

1. 修復/透化/阻斷細胞或組織

2. 在封閉緩沖液中添加一抗

3. 加入結合HRP的二抗

4. 準備Styramide™工作溶液，并在室溫下涂在細胞或組織中5-10分鐘

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。

1. Styramide™儲備溶液（100X）：
   將100 µL DMSO加入iFluor™染料標記的Styramide™偶聯(lián)物小瓶中，制成100X Styramide™儲備溶液。注意：一次性使用等分試樣，并將未使用的100X儲備溶液在2-8 ^o C的暗處存儲，并避免重復凍融循環(huán)。
   

2. H ₂ O ₂  儲備溶液：
   將90 µL的ddH ₂ O 加入10 µL的3％過氧化氫（未提供）。注意：在使用當天準備新鮮的100X H ₂ O ₂溶液。

準備工作溶液

1. Styramide™工作溶液（1X）：
   每1 mL反應緩沖液需要10 µL Styramide™儲備溶液和10 µL H ₂ O ₂  儲備溶液。注意：根據蓋玻片或96孔微孔板中每孔所需的100 µL Styramide™工作溶液，提供的Styramide™足以進行100次測試。注意：  必須在制備后2小時內使用Styramide™工作溶液，并避免直接暴露在光線下。
   

2. 二級抗體-HRP工作溶液：
   按照制造商的建議適當濃度的二級抗體-HRP工作溶液。

程序

該方案適用于細胞和組織染色。

細胞固定和通透性

1. 在室溫下用3.7％甲醛或低聚甲醛的PBS固定細胞或組織20分鐘。
   

2. 用PBS沖洗細胞或組織兩次。
   

3. 在室溫下用0.1％Triton X-100溶液透化細胞1-5分鐘。
   

4. 用PBS沖洗細胞或組織兩次。

組織固定，脫石蠟和補液

根據標準IHC規(guī)程對組織進行脫蠟和脫水處理。根據需要使用的特定溶液/協(xié)議進行抗原修復。

1. 可選：通過在過氧化物酶淬滅溶液（例如3％過氧化氫）中孵育細胞或組織樣品10分鐘來淬滅內源性過氧化物酶活性。在室溫下用PBS沖洗兩次。
   

2. 可選：如果使用結合HRP的鏈霉親和素，建議通過shengwusu封閉緩沖液封閉內源性shengwusu。
   

3. 在4°C下用的封閉溶液（例如含1％BSA的PBS）封閉30分鐘。
   

4. 除去封閉溶液，并添加在推薦抗體稀釋液中稀釋的一抗，在室溫下放置60分鐘，或在4°C下放置過夜。
   

5. 用PBS洗滌3次，每次5分鐘。
   

6. 將100 µL二級抗體-HRP工作溶液應用于每個樣品，并在室溫下孵育60分鐘。注意：孵育時間和濃度可以根據信號強度而變化。
   

7. 用PBS洗滌3次，每次5分鐘。

苯乙烯酰胺標記

1. 準備并向每個樣品上涂100 µL Styramide™工作溶液，并在室溫下孵育5-10分鐘。 注意：如果您觀察到非特異性信號，則可以縮短與苯乙烯酰胺的孵育時間。您應該在不同的孵育時間點使用陽性和陰性對照樣品優(yōu)化孵育時間。或者您可以在工作溶液中使用較低濃度的苯乙烯酰胺。
   

2. 用PBS沖洗3次。

復染和熒光成像

1. 根據需要對細胞或組織樣本進行復染。AAT提供了一系列核復染色試劑，如表1所示。請按照試劑隨附的說明進行操作。
   

2. 使用具有防褪色特性的安裝介質安裝蓋玻片。
   

3. 使用適當的過濾器設置以可視化來自苯乙烯酰胺標簽的信號。

表1.建議用于核復染色的產品。

普通儲備溶液的制備

表1.重構特定質量的iFluor™350苯乙烯酰胺所需的DMSO體積* Alexa Fluor 350酪酰胺的高級替代品*至給定濃度。請注意，該體積僅用于制備儲備溶液。有關適當的實驗/生理緩沖液，請參閱樣本實驗方案。

糖度計算器

輸入任何兩個值（質量，體積，濃度）以計算第三個值。