大多數商業化的蛋白激酶檢測試劑盒都是基于對磷酸肽形成或ATP缺失的監測。對于基于磷酸肽檢測的激酶測定試劑盒,人們不得不花費時間和精力來鑒定優化的肽底物,而ATP消耗方法由于使用了受多種生物化合物抑制或激活的熒光素酶而遭受了各種干擾。Amplite™通用激酶測定試劑盒基于對ADP形成的監測,該形成與酶磷酸轉移酶活性成正比,并進行熒光測定。該試劑盒提供了一種快速,簡單且均一的測定激酶活性的測定方法。高靈敏度(<0.2 uM ADP),寬泛的ATP耐受性(1-300 uM),非抗體,非放射性和免清洗方法可檢測由于酶活性而產生的ADP量,使其成為測定激酶Michaelis-Menten動力學以及篩選和鑒定激酶抑制劑的理想試劑盒。可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行測定,無需任何分離步驟即可輕松實現自動化。
熒光酶標儀 | |
激發 | 540納米 |
發射 | 590納米 |
隔斷 | 570納米 |
推薦板 | 純黑色 |
組件A:ADP傳感器緩沖器 | 1小瓶(5毫升) |
組件B1:ADP傳感器I(光敏) | 1瓶粉 |
組件B2:ADP傳感器II | 1小瓶(2.5毫升) |
組件B3:DMSO | 1小瓶(100 µL) |
組件C:ADP標準 | 1個小瓶 |
組分D:ADP分析緩沖液 | 1小瓶(10毫升) |
- 運行激酶反應(20 µL)
- 添加ADP傳感器緩沖液(20 µL)
- 添加ADP傳感器工作溶液(10 µL)
- 在室溫下孵育15分鐘-1小時
- 監測Ex / Em = 540/590 nm(截止= 570nm)的熒光強度
重要說明
使用前,請在室溫下解凍所有六種成分。強烈建議使用黑色印版以獲得*效果。ADP分析應在6.5至7.4的pH下進行。避免將ADP傳感器I(組件B1)直接暴露在光下。避免來自外來生物源的潛在ADP污染。
儲備溶液的制備
除非另有說明,否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣,并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環。
1. ADP傳感器I儲備溶液(50X):
將50 µL DMSO(組分B3)添加到ADP傳感器1(組分B1)的小瓶中,制成50X ADP傳感器I儲備溶液。
2. ADP標準溶液(300 mM):
將100 µL ddH 2 O加入ADP標準溶液(組分C)中,制成300 mM ADP標準溶液。
31001 | Amplite™熒光法通用型蛋白激酶檢測試劑盒 *紅色熒光* | Amplite™ Universal Fluorimetric Kinase Assay Kit *Red Fluorescence* | 200 Tests |
31002 | Amplite™熒光法通用型蛋白激酶檢測試劑盒 *紅色熒光* | Amplite™ Universal Fluorimetric Kinase Assay Kit *Red Fluorescence* | 500 Tests |
32000 | Bodi Fluor™ 488-Cephaeline Conjugate | Bodi Fluor™ 488-Cephaeline Conjugate | 1 mg |
35999 | Screen Quest™膜電位檢測試劑盒*橙色熒光* | Screen Quest™ Membrane Potential Assay Kit *Orange Fluorescence* | 1 plate |
36000 | Screen Quest™膜電位檢測試劑盒*橙色熒光* | Screen Quest™ Membrane Potential Assay Kit *Orange Fluorescence* | 10 plates |
36001 | Screen Quest™膜電位檢測試劑盒*橙色熒光* | Screen Quest™ Membrane Potential Assay Kit *Orange Fluorescence* | 100 plates |