產品信息：

產品簡介：

CFDA SE的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，是一種近年來被廣泛應用的細胞增殖檢測用熒光探針，也可以用于細胞的熒光示蹤。基于CFDA SE熒光標記的細胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標記獲得的檢測結果*一致，但同時可以提供更多的細胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細胞群中有多少比例的細胞分裂了1次、2次或更多次數，同時如果和其它熒光探針聯用，可以獲取不同分裂次數細胞的其它相關信息，CFDA SE可以通透細胞膜，進入細胞后可以被細胞內的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發性地(spontaneously)并不可逆地和細胞內蛋白的Lysine殘基或其它氨基發生結合反應，并標記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標記細胞。被CFDA SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，穩定標記的時間可達數個月。CFDA SE標記細胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且 分裂后的子代細胞的熒光分配也更均勻。

      由于CFDA SE標記細胞的熒光非常均勻和穩定，每分裂一次子代細胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細胞，分裂一次的細胞(1/2的熒光強度)，分離兩次的細胞(1/4的熒光強度)，分裂三次的細胞(1/8的熒光強度)以及類似的其它分裂次數的細胞。采用CFDA SE通過流式細胞儀檢測獲得的檢測結果參考右圖。每一個峰代表一種分裂次數的細胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數的細胞。分裂次數較多后，分裂0次或1次等沒有分裂或分裂次數較少的細胞會逐漸減少直至檢測不到。

      使用CFDA SE可以檢測分裂多達8次或更多次數的細胞增殖。

      目前CFDA SE標記細胞后通常用流式細胞儀進行細胞增殖檢測。zui常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細胞、NK細胞等其它細胞的增殖檢測，甚至還可以用于細菌增殖的檢測。

      CFDA SE標記細胞呈綠色熒光，檢測時的激發波長可以選擇488nm，此時的發射波長為518nm，使用流式細胞儀檢測時可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標記的細胞也可以用熒光顯微鏡進行觀察。

      CFDA SE標記的細胞無論在體外還是體內都不會使鄰近細胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標記后不會從一個細胞轉移到鄰近細胞。

      CFDA SE標記細胞僅需5-15分鐘即可完成。對于不同細胞，*標記時間需自行摸索。

      CFDA SE可以使用無水DMSO(anhydrous DMSO)配制，配制濃度通常為2-10mM，該溶液宜盡快使用，zui長保存時間不宜超過2個月。CFDA SE易被水解，如用PBS或其他溶液配制好的工作液須盡快使用，否則在水溶液中會很快變質。在標記細胞的過程中和水接觸是在許可的范圍內的。CFDA SE標記細胞時的zui終濃度通常為0.2-10μM或更高一些。

      在工作濃度為5μM時，一個包裝的本產品共可以標記約1.8升的細胞。

產品特性

CAS NO.：150347-59-4

化學名：3',6'-bis(acetyloxy)-3-oxo-2,5-dioxo-1-pyrrolidinyl ester-spiro[isobenzofuran-1(3H),9'-[9H]xanthene] -ar-carboxylic acid

同義名：5(6)-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester, 5(6)-CFDA N-succinmidyl ester, CFDA-SE

分子式：C29H19

分子量：557.46

純度：≥94%（HPLC）

Ex/Em：492/517nm

外觀：近乎白色至黃色粉末或結晶

溶解性：溶于DMSO，DMF

保存條件：-20℃避光保存，一年有效。

使用方法：

a. CFSE儲存液（5mM）的配制，用1ml DMSO溶解2.79mg CFSE，充分混勻即得到5mM的儲存液（1mg/ml的CFSE溶液濃度，相當于其摩爾濃度1.8mM）。【注意】該儲存液需立即使用，根據使用量計算如有剩余請務必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復凍融。

b. CFSE工作液（0.5-5μM）的配制，使用前用含20mM Hepes的Hanks 緩沖液（HHBS）或其他不含氨基的合適緩沖液（pH=7.0），對上述CFSE 儲存液進行1,000~10,000倍稀釋，并旋渦震蕩混勻。

c. 注意

以下是針對活細胞染色的推薦步驟，可根據實際情況進行適當調整。根據實驗要求，用適當藥物處理細胞；離心收集細胞，調整細胞濃度為1-5×105個/管；用500μl CFSE工作液懸浮細胞，于室溫或37℃避光孵育10-30min；吸除CFSE 染液，用HHBS或其他合適緩沖液清洗細胞，用500μl預熱HHBS或培養液懸浮細胞；在Ex/Em=490/520nm下用流式細胞儀（FL1通道）或熒光顯微鏡觀察細胞。

注意事項

不同的細胞其細胞內酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。

熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。

為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。