次氯酸根陰離子（ClO-）及其質子化形式次氯酸（HClO）是生物系統中的關鍵活性氧（ROS）。次氯酸鹽（次氯酸）的不受控制的生產會導致組織損傷和疾病，包括關節炎，腎衰竭和癌癥。此外，次氯酸鈉（NaClO）已廣泛用作我們日常生活中用于表面清潔，除臭和水消毒的漂白劑。暴露于大量的次氯酸鈉會導致中毒，癥狀包括嚴重的呼吸問題，胃部刺激，皮膚和眼睛發紅和疼痛。因此，高選擇性和靈敏的次氯酸鹽（次氯酸）檢測具有毒理學和環境重要性。Amplite™熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒提供了一種靈敏的基于熒光的分析方法，可高度特異性地測量次氯酸鹽（次氯酸）。與次氯酸鹽（次氯酸鹽）選擇性反應后，弱熒光的Oxirite™次氯酸鹽傳感器會產生強熒光的產品，其熒光增強作用會超過100倍。熒光信號可以通過熒光酶標儀讀取。使用該熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒，在100 µL反應體積中可檢測到低至0.4 µM次氯酸鹽。與次氯酸鹽（次氯酸鹽）選擇性反應后，弱熒光的Oxirite™次氯酸鹽傳感器會產生強熒光的產品，其熒光增強作用會超過100倍。熒光信號可以通過熒光酶標儀讀取。使用該熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒，在100 µL反應體積中可檢測到低至0.4 µM次氯酸鹽。與次氯酸鹽（次氯酸鹽）選擇性反應后，弱熒光的Oxirite™次氯酸鹽傳感器會產生強熒光的產品，可提供超過100倍的熒光增強。熒光信號可以通過熒光酶標儀讀取。使用該熒光次氯酸鹽（次氯酸）分析試劑盒，在100 µL反應體積中可檢測到低至0.4 µM次氯酸鹽。

1. 準備次氯酸鹽標準液或測試樣品（50 µL）
2. 添加次氯酸鹽工作溶液（50 µL）
3. 在室溫下孵育10-30分鐘
4. 監測Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光強度

重要說明
為了獲得*效果，強烈建議使用黑色印版。開始實驗前，在室溫下解凍每個試劑盒成分的小瓶。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環。

1. Oxirite™次氯酸鹽傳感器儲備溶液（200X）：
將50 µL DMSO（組分D）添加到Oxirite™次氯酸鹽傳感器（組分A）小瓶中，制成200X儲備溶液。避光。

配制標準溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

將50 µL次氯酸鹽標準液（組分C）添加到450 µL測定緩沖液（組分B）中，得到100 mM次氯酸鹽標準溶液（H7）。取100 mM（H7）次氯酸鹽標準溶液，并在測定緩沖液（組分B）中進行1:10系列稀釋，以得到10、1、0.1和0.01 mM系列次氯酸鹽標準品（H6-H3）。然后，加入0.01 mM次氯酸鹽標準液（H3），并在測定緩沖液（B組份）中以1：3的比例進行稀釋，得到0.003和0.001 mM的次氯酸鹽稀釋液標準液（H2-H1）。 

準備工作溶液

將25 µL 200X Oxirite™次氯酸鹽傳感器儲備溶液添加到5 mL的測定緩沖液（組分B）中，并充分混合以制成次氯酸鹽工作溶液。注意：這種次氯酸鹽工作溶液足以用于一個96孔板。它不穩定，請及時使用。

程序

表1.  96孔黑色實心微孔板中次氯酸鹽標準品和測試樣品的布局。H =次氯酸鹽標準品（H1-H7，0.001至100 mM），BL =空白對照，TS =測試樣品。 

表2.  每個孔的試劑組成。

1. 根據表1和2中提供的布局，準備次氯酸鹽標準品（H），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
    
2. 將50 µL次氯酸鹽工作溶液添加到次氯酸鹽標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中，以使次氯酸鹽總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，請向每個孔中添加25 µL次氯酸鹽工作溶液，總體積為50 µL /孔。
    
3. 在避光條件下，于室溫下孵育反應10-30分鐘。
    
4. 使用熒光板讀數器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處監控熒光的增加。

數據分析

4.0e+33.0e+32.0e+3100010001001010.1- Data 1Data legendGenerated with Quest Graph™Hypochlorite (uM)RFU (540/590nm)Hover mouse to interact

從空白標準孔獲得的讀數（RFU（540 / 590nm））用作陰性對照。從其他標準的讀數中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標準讀數，以獲得標準曲線和方程式。該方程式可用于計算次氯酸鹽樣品。