氟胺本質(zhì)上是不發(fā)熒光的，但會與脂族伯胺（包括肽和蛋白質(zhì)中的胺）迅速反應(yīng)，生成藍綠色熒光衍生物。Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒提供了一種簡單的定量溶液中蛋白質(zhì)濃度的方法。該Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒可以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，無需任何分離步驟即可輕松實現(xiàn)自動化。該測定可以在30分鐘內(nèi)完成。使用Amplite™熒光胺蛋白測定試劑盒，可以檢測到低至3 ug / mL的BSA。

1. 準備BSA標準品或測試樣品（75 µL） 
2. 加入熒光胺工作溶液（25 µL）
3. 在室溫下孵育5-30分鐘
4. 在Ex / Em = 380/470 nm時讀取熒光強度

重要說明
開始實驗之前，請在室溫下解凍所有試劑盒組件。

配制標準溶液

為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計

通過以1：2的系列稀釋度將適量的BSA標準品1 mg / mL（組分C）稀釋到PBS中以獲得BSA標準品（BS7-BS1）的系列稀釋液。

準備工作溶液

將全部內(nèi)容的DMSO（組分B）添加到瓶中的熒光胺（組分A）中，并充分混合。注意： 2.5 mL的熒光胺工作溶液足以裝滿1個板。

程序

表1. 黑色96孔微孔板中BSA標準品和測試樣品的布局。BS = BSA標準品（BS1-BS7，1.563至100 µg / mL），BL =空白對照，TS =測試樣品。

表2. 每個孔的試劑組成。

1. 根據(jù)表1和表2提供的布局，準備BSA標準品（BS），空白對照（BL）和測試樣品（TS）。對于384孔板，每孔使用30 µL試劑，而不是75 µL。
    
2. 在BSA標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中添加25 µL熒光胺工作溶液，以使總測定體積為100 µL /孔。對于384孔板，請向每個孔中添加10 µL熒光胺工作溶液，總體積為40 µL /孔。
    
3. 在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)5至30分鐘。
    
4. 使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 380/470 nm處監(jiān)控熒光的增加。

數(shù)據(jù)分析

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從空白標準孔獲得的讀數(shù)（RFU）用作陰性對照。從其他標準的讀數(shù)中減去該值即可得到基線校正值。然后，繪制標準讀數(shù)，以獲得標準曲線和方程式。該公式可用于計算BSA樣本。我們建議您使用在線線性回歸計算器，