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鎮(zhèn)江博研生物科技有限公司
angiostatin
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更新時(shí)間:2021-07-28 11:36:50瀏覽次數(shù):142次
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產(chǎn)品貨號(hào):BYS-10893B
試劑盒保存:2-8℃
常用規(guī)格:96T/48T
elisa試劑盒 特點(diǎn):敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn),售后:產(chǎn)品質(zhì)量嚴(yán)謹(jǐn),如有質(zhì)量問(wèn)題(非人為因素)免費(fèi)退換
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酶標(biāo)板可以拆卸,分幾次用,如果設(shè)立雙標(biāo)準(zhǔn),可以做三次;如果設(shè)定單標(biāo)準(zhǔn),可以做6次
標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合的四種:對(duì)數(shù),指數(shù),二次函數(shù)和直線
試劑盒應(yīng)用用于:實(shí)驗(yàn)室研究使用。
實(shí)驗(yàn)儀器:酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、離心機(jī)、培養(yǎng)箱等
試劑盒檢測(cè):操作簡(jiǎn)單、快速、敏感性高、特異性強(qiáng)
elisa原理:應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中P53的水平。
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人血管抑素/血管穩(wěn)定蛋白ELISA試劑盒 做ELISA的經(jīng)驗(yàn)總結(jié):
1、包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識(shí)破,所以保存抗原很重要,做重組蛋白時(shí),一定要在冰浴下緩慢融化就是這個(gè)道理。
2、包被液的選擇,一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液,但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖液來(lái)包。應(yīng)注意以下原理:由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用,這種物理吸附是非特異性的,受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響,大分子蛋白質(zhì)部較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán),骨更易吸附到固相載體表面。
3、封閉:繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程。封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的在吸附。常用封閉劑有0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較廉價(jià),可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動(dòng)物血清(主要為了排除相似蛋白干擾)和酪蛋白等等。但終選用什么,要依據(jù)試驗(yàn)具體來(lái)實(shí)踐。
4、洗滌板:可以說(shuō)是ELISA操作中,洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù)。因?yàn)榫郾揭蚁┑人芰蠈?duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,為達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的,清除殘留在板孔中游離的物質(zhì),以及非特異性的吸附的干擾物質(zhì),在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。所以在洗板時(shí)會(huì)有一定誤差,人為因素很大(當(dāng)然有條件的用洗板機(jī)除外),洗的不徹底或串了孔,對(duì)如此靈敏的ELISA系統(tǒng)可是不小的影響。
5、加抗體標(biāo)本(和二抗):注意該換槍頭時(shí)換槍頭。標(biāo)本稀釋一般可用pbs稀釋,也可用封閉液去稀釋。如需加二抗,還要注意二抗的工作濃度,太高浪費(fèi),太低則著色淺。
6、顯色:顯色系統(tǒng)有很多,我們一開(kāi)始的時(shí)候,要選擇適宜的顯色系統(tǒng)。注意顯色系統(tǒng)酶活性底物的保存HRP結(jié)合物加硫柳泵,AP結(jié)合物可加疊氮鈉。
7、每次做盡量要把陰陽(yáng)空三個(gè)對(duì)照做好,如出現(xiàn)問(wèn)題也好分析。
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