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南京億迅生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 質(zhì)控樣品,人工血清,人工胃液,elisa試劑盒,化學(xué)試劑,生物試劑 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
- 型號
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- 所在地 南京市
更新時間：2020-06-19 17:29:37瀏覽次數(shù)：404
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HRP標(biāo)記的兔抗大鼠IgM
本產(chǎn)品僅用于研究用途，不用于人類、治療或診斷應(yīng)用。
| 抗體來源 | Rabbit |
| 克隆類型 | Polyclonal |
| 交叉反應(yīng) | rat |
| 產(chǎn)品應(yīng)用 | WB=1:1000-10000 ELISA=1:1000-10000 IHC-P=1:100-1000 IHC-F=1:100-1000 not yet tested in other applications. optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user. |
| 分 子 量 | 900kDa |
| 性 狀 | Lyophilized or Liquid |
| 濃 度 | 2mg/1ml |
| 免 疫 原 | Full length plasma protein: |
| 亞 型 | IgG |
| 純化方法 | affinity purified by Protein A |
| 儲 存 液 | 0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol. |
| 保存條件 | Storage: Store at –20 oC for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles. The lyophilized antibody is stable at room temperature for at least one month and for greater than a year when kept at -20oC. When reconstituted in sterile distilled water or diluent supplied, theantibody is stable for at least two weeks at 2-4 °C. |
HRP標(biāo)記的兔抗大鼠IgM
一、戊二醛二步法
1. 原理
戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價(jià)結(jié)合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結(jié)合物。
2. 標(biāo)記步驟
（1）稱取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室溫靜置過夜。
（2）反應(yīng)后的酶溶液經(jīng)Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml/1分鐘，收集棕色流出液。如體積大于5ml，則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。
（3）將待標(biāo)記的抗體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中。
（4）用1M PH9.5碳酸緩沖液0.25ml，繼續(xù)攪拌3小時。
（5）加0.2M賴氨酸0.25ml，混勻后，置室溫2小時。
（6）在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃ 1小時。
（7）3000rpm離心半小時，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。
（8）將上述溶液裝入透析袋中，對0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析，去除銨離子后(用萘氏試劑檢測)，10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，分裝后，冰凍保存。
3. 結(jié)果判定
（1）定性及效價(jià)滴定：用特異性抗原(或抗體)同酶標(biāo)記抗體(或抗免疫球蛋白抗體)作雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)或免疫電泳試驗(yàn)。然后用酶的底物使沉淀弧顯色，可初步鑒定其活性。zui后以直接ELISA法(或在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里)對酶結(jié)合物進(jìn)行滴定( 見本節(jié) (三)工作濃度的選擇)。
（2）定量和克分子比值測定：可用分光光度計(jì)測定(光程1cm)。
酶量(mg/ml)＝OD403nm×0.4
IgG量(mg/ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.42)×0.94×0.62
（3）本法標(biāo)記步驟比較簡單，重復(fù)性好。缺點(diǎn)是酶的利用率低，一般只有2-4%的酶與蛋白質(zhì)結(jié)合。
4. 試劑及器材
（1）0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸餾水至200ml。
（2）1.25%戊二醛液：取25%戊二醛50ml與PH6.8的PBS 1ml混合。
（3）1M PH9.5碳酸鹽緩沖液：取1M碳酸鈉3ml與1M碳酸氫鈉7ml混合。
