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南京億迅生物科技有限公司
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- 型號 膽固醇
- 品牌
- 廠商性質 生產商
- 所在地 南京市
更新時間：2019-11-06 16:57:43瀏覽次數：887
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一、原理
當固醇類化合物與酸作用時，可脫水并發生聚合反應，產生顏色物質。因此可先對食品樣品進行皂化和提取，用硫磷鐵試劑作為顯色劑，測定食品中膽固醇的含量。
在樣品的冰乙酸提取液中加磷硫鐵試劑，膽固醇與試劑反應產生紫紅色化合物，顏色的深淺與膽固醇的量成正比，可用分光光度計在波長560nm處測定。
二、實驗儀器及試材
1.儀器：分光光度計、水浴鍋
2.試劑：本實驗用水均需用蒸餾水或去離子水。試劑純度均為分析純。
（1）石油醚（沸點30-60℃）、無水乙醇、冰乙酸。
（2）50%氫氧化鉀溶液：稱取50g氫氧化鉀，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
（3）25%氯化鈉溶液：稱取25g氯化鈉，用蒸餾水溶解，并稀釋至100mL。
（4）10%三氯化鐵溶液：將10gFeCl3·6H2O溶于磷酸中，定容至100mL，儲于棕色瓶中，冷藏保存。
（5）磷硫鐵試劑：取10%三氯化鐵溶液1.5mL于100mL棕色容量瓶內，加濃硫酸定容至刻度。
（6）膽固醇標準儲液：準確稱取膽固醇100mg，溶于冰乙酸中，定容至100mL。
（7）膽固醇標準溶液：臨用前將儲液用冰乙酸稀釋10倍。
三、實驗方法與步驟
1.樣品膽固醇提取
準確稱取充分混勻的雞蛋約0.20g于25mL具塞比色管中，加入0.5mL50%氫氧化鉀溶液和4.5mL無水乙醇，振蕩混勻，在80℃恒溫水浴中皂化20min。皂化時每隔5min振搖一次使皂化*。皂化完畢，取出比色管，冷卻。加入3mL25%氯化鈉溶液后再加入10mL石油醚，蓋緊玻璃塞，振搖1min，靜置分層。
取上層石油醚液1mL，置于25mL具塞比色管內，在65℃水浴中讓石油醚自然揮發干，加入4mL冰乙酸，輕搖使膽固醇溶解，待測。
2.樣品和標準膽固醇含量測定另取兩支25mL具塞比色管，一支（空白管）加入4mL冰乙酸，一支（標準管）加入1mL膽固醇標準溶液（0.1mg/mL）和3mL冰乙酸。包括樣品管，各管分別加入2mL磷硫鐵試劑，混勻，25℃放置20min后在560nm波長下比色。以空白管調零，測得吸光度。
四、計算
雞蛋膽固醇（mg/100g）=A樣/A標╳0.025mg/mL╳4mL╳10mL/1mL╳100/M樣g
=A樣/A標╳100/M樣（mg/100g）
五、實驗注意事項
濃硫酸、強堿溶液具有腐蝕性，小心操作。
