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南京億迅生物科技有限公司
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更新時間：2019-11-07 15:00:42瀏覽次數：541
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谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體50mL×2瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2瓶， 4℃保存；臨用前每瓶加入5mL雙蒸水，用不完的試劑仍 4℃保存。
谷氨酸提取：
細菌、細胞或組織樣品
收集細胞或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每1000萬細菌或細胞加入2mL試劑一，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復30次）， 8000g，常溫離心10min，取上清待測。
稱取約0.2g組織，加入2mL試劑一進行冰浴勻漿， 8000g，常溫離心10min，取上清待測。
測定步驟
- 分光光度計預熱30min以上，調節波長至570nm，蒸餾水調零。
- 在有蓋EP管中加入下列試劑：
試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 |
上清液 | 1000 |
|
試劑一 |
| 1000 |
試劑二 | 200 | 200 |
混勻，90℃水浴20min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，于570nm波長處比色，△A=A測定管-A對照管。對照管只要做一管。
注意事項：
為提高檢測靈敏度，測定管的吸光值應小于1，若大于1則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數后測定。
谷氨酸含量計算：
1、標準條件下測定回歸方程為y = 0.0328x- 2.423； x為谷氨酸含量（µg/mL），y為吸光值。
2、按照蛋白濃度計算
谷氨酸含量（µg/mg）=(△A +2.423)÷0.0328÷Cpr=30.49×(△A+2.423) ÷Cpr
3、按照樣品質量計算
谷氨酸含量（µg/g鮮重）=(△A +2.423)÷0.0328÷(W÷V樣總）=60.98×(△A+2.423) ÷W
4、按照細菌或細胞密度計算
谷氨酸含量（μg/104 cell）＝(△A +2.423)÷0.0328÷（1000÷V樣總）=0.061×(△A+2.423)
V樣總：加入提取液體積，2mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣品質量，g；1000：細菌或細胞總數，1000萬。
注意：該試劑盒僅適用于發酵液或組織中谷氨酸含量測定，檢測下限為70µg/mL。
谷氨酸(Glu)含量檢測試劑盒
