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南京億迅生物科技有限公司
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半胱氨酸（cysteine, Cys）含量測定試劑盒
2019-12-24 閱讀(347)
| 提 供 商 | 南京億迅生物科技有限公司 | 資料大小 | 30KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 【點擊查看】 | 下載次數 | 38次 |
| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數 | 347次 |
測定意義：
蛋白質含有三種含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys是一種含有巰基的含硫氨基酸，從甲硫氨酸轉化而來，并且可與胱氨酸互相轉化。Cys參與蛋白質二硫鍵的形成，經常是蛋白質活性中心的組成部分，還可以為其它生理生化反應提供巰基。此外，Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面，在角蛋白生成中維持重要的巰基酶的活性，并且補充巰基，以維持皮膚的正常代謝，調節表皮下層的色素細胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用。
測定原理：
Cys還原磷鎢酸生成鎢藍，在600nm處有吸收峰；通過600nm吸光度，計算Cys含量。
自備儀器和用品：
低溫離心機、可調式移液槍、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、磷酸和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。用前1天，向試劑三中加2.5mL蒸餾水充分溶解，再加磷酸0.625mL，混勻后蓋緊（防止水分散失）沸水浴2h；冷卻后加10mL蒸餾水，4℃可保存2周。
標準品：液體×1瓶，1μmol/mL標準液，4℃保存。
半胱氨酸提取：
- 液體樣品中半胱氨酸提取：取0.1mL液體樣品，加試劑一0.9mL，充分混勻，11000 rpm 4℃離心10min，取上清液，待測。
- 組織中半胱氨酸提取：稱取約0.1 g組織，加入試劑一1 mL，冰上充分研磨，11000 rpm 4℃離心10 min，取上清液待測。
測定操作：
1. 酶標儀預熱30 min以上，調節波長到600 nm，蒸餾水調零。
2. 空白管：取1mL玻璃比色皿，加入20μL蒸餾水，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測定吸光值，記為A空白管。
3. 標準管：取1mL玻璃比色皿，加入20μL標準液，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測定吸光值，記為A標準管。
4. 測定管：取1mL玻璃比色皿，加入20μL上清液，100μL試劑二，100μL試劑三，混勻后室溫靜置15 min，于600nm處測定吸光值，記為A測定管。
樣品中半胱氨酸含量計算：
1. 按液體樣品的體積計算
半胱氨酸含量（μmol/mL）
=[C標準品×V標準品×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×（V樣總÷V樣）
=10×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)
C標準品：標準品濃度，1 μmol/mL；V標準品：反應體系中加入標準品體積，0.1 mL；V樣：反應體系中加入樣品提取液體積，0.1 mL；V樣總：樣品提取液，1mL。
2. 按鮮重計算
半胱氨酸含量（μmol/g FW）
=[C標準品×V標準品×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白)]×（V樣總÷V樣）÷W
=1×(A測定－A空白)÷(A標準－A空白) ÷W
W：樣品質量，g。
