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  我們都知道，在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中，試劑可能會(huì)受到各種干擾物質(zhì)的影響，導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果。這些干擾物質(zhì)可以分為內(nèi)源性和外源性?xún)深?lèi)。內(nèi)源性干擾物質(zhì)通常是由于樣品本身的特性或病理原因產(chǎn)生的，如異嗜性抗體、自身抗體、補(bǔ)體等；而外源性干擾物質(zhì)則主要來(lái)自樣品處理或檢測(cè)過(guò)程中的外部因素，如脂血、溶血、黃疸等。本文將詳細(xì)介紹免疫實(shí)驗(yàn)中常見(jiàn)的干擾物質(zhì)及其干擾消除方法。

一、內(nèi)源性干擾物質(zhì)及其干擾消除方法：

1、異嗜性抗體（Heterophil antibody, HA）：異嗜性抗體是一類(lèi)針對(duì)定義不明確的抗原產(chǎn)生的具有多重特異性的免疫球蛋白。它們通常顯示弱親和力，能與多種動(dòng)物制成的生物制劑的抗體結(jié)合，從而干擾測(cè)定結(jié)果。它們可以導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性結(jié)果，特別是在HIV、AFP、CA125、PCT等檢測(cè)中尤為常見(jiàn)。

為了消除異嗜性抗體的干擾，可以采用以下幾種方法：

?（1）使用與檢測(cè)/捕獲抗體亞型一致的動(dòng)物Ig?：這可以通過(guò)特異性結(jié)合來(lái)消除異嗜性抗體的干擾。

?（2）?使用阻斷劑?：阻斷劑可以封閉異嗜性抗體的結(jié)合位點(diǎn)，從而減少其干擾。常用的阻斷劑包括正常動(dòng)物血清的混合物，這些混合物可以有效地吸收異嗜性抗體。

??（3）樣本稀釋和連續(xù)稀釋檢測(cè)?：將樣本倍數(shù)稀釋后再檢測(cè)，若測(cè)值呈非線(xiàn)性，說(shuō)明存在干擾物。這種方法可以幫助確認(rèn)異嗜性抗體的存在。

2、自身抗體：自身抗體是針對(duì)自身抗原成分產(chǎn)生的一類(lèi)抗體，它們可能與惡性疾病或自身免疫功能紊亂有關(guān)。如抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素、抗甲狀腺激素抗體等，這些抗體能與相應(yīng)靶抗原形成復(fù)合物，從而干擾測(cè)定結(jié)果。

消除自身抗體干擾的方法包括：

?（1）?使用理化方法將其解離后再測(cè)定?：這可以通過(guò)改變樣本的pH值、溫度或添加特定的化學(xué)試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。

?（2）?使用阻斷劑?：阻斷劑可以封閉自身抗體的結(jié)合位點(diǎn)，從而減少其干擾。例如，不同濃度的PEG可沉降不同分子量大小的蛋白，有助于消除自身抗體引起的干擾。

?（3）?更換原料抗體的種屬?：有時(shí)候，改變?cè)峡贵w的種屬可以降低與自身抗體結(jié)合的可能性。

3、補(bǔ)體（Complement）：補(bǔ)體是一種血清蛋白質(zhì)，存在于人和脊椎動(dòng)物血清及組織液中。在免疫檢測(cè)系統(tǒng)中，抗體固相包被或標(biāo)記導(dǎo)致抗體分子發(fā)生變構(gòu)，其Fc段的補(bǔ)體C1q分子結(jié)合位點(diǎn)暴露，C1q橋聯(lián)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。

為了消除補(bǔ)體的干擾，可以采用以下方法：

??（1）使用EDTA處理樣本?：EDTA可以與補(bǔ)體結(jié)合，從而使其失去活性。通常使用終濃度為10～40 mmol/L的EDTA溶液處理樣本。

??（2）加熱樣本?：將樣本在53℃加熱10分鐘可以滅活補(bǔ)體C1q，從而減少其干擾。

二、外源性干擾物質(zhì)及其干擾消除方法：

1、脂血：脂血是臨床檢驗(yàn)中一種常見(jiàn)的干擾檢測(cè)的樣本性狀。發(fā)生脂濁的血清樣本中含有大量的乳糜微粒和極低密度脂蛋白，這些物質(zhì)具有光散射的特性，會(huì)產(chǎn)生濁度，從而影響反應(yīng)的吸光度值或使產(chǎn)物的顏色發(fā)生變化。

消除脂血干擾的方法包括：

2、樣本稀釋?：使用0.9%氯化鈉溶液稀釋法可以去除乳糜，減少干擾。

?3、使用離心分離技術(shù)?：通過(guò)離心分離去除樣本中的乳糜微粒和極低密度脂蛋白。

4、溶血：溶血時(shí)，紅細(xì)胞破裂會(huì)釋放出血紅蛋白、胰島素降解酶、鐵蛋白等物質(zhì)，這些物質(zhì)會(huì)干擾測(cè)定結(jié)果。

消除溶血干擾的方法包括：

??（1）?設(shè)置適當(dāng)?shù)母辈ㄩL(zhǎng)?：通過(guò)調(diào)整檢測(cè)波長(zhǎng)來(lái)減少血紅蛋白等物質(zhì)的干擾。

??（2）?使用Hb單克隆抗體處理樣本?：Hb單克隆抗體可以特異性地結(jié)合血紅蛋白，從而減少其干擾。

??（3）黃疸：黃疸時(shí)，膽-紅-素水平升高，膽紅素通過(guò)本底干擾、光譜干擾影響測(cè)定結(jié)果。

5、消除黃疸干擾的方法包括：

（1）?設(shè)置合適的副波長(zhǎng)?：通過(guò)調(diào)整檢測(cè)波長(zhǎng)來(lái)減少膽紅素的干擾。

（2）?樣本預(yù)稀釋?：通過(guò)稀釋樣本來(lái)降低膽紅素的濃度，從而減少其干擾。

三、其他干擾消除方法：

除了針對(duì)特定干擾物質(zhì)的消除方法外，還有一些通用的干擾消除方法可以在實(shí)驗(yàn)試劑的研制和應(yīng)用中使用：

?1、使用免疫阻斷劑?：免疫阻斷劑可以用來(lái)封閉或清除樣本中潛在的干擾物質(zhì)。阻斷劑分為被動(dòng)阻斷劑和主動(dòng)阻斷劑。主動(dòng)阻斷劑可以特異、主動(dòng)、高效地中和干擾抗體，從而消除其干擾。

2、優(yōu)化反應(yīng)條件?：通過(guò)調(diào)整酸堿度、離子強(qiáng)度、溫度、抗原抗體比例、反應(yīng)時(shí)間等條件來(lái)優(yōu)化免疫反應(yīng)，減少干擾物質(zhì)的影響。

?3、改進(jìn)檢測(cè)方法?：采用更靈敏、更特異的檢測(cè)方法可以減少干擾物質(zhì)的影響。例如，使用納米顆粒標(biāo)記的免疫檢測(cè)方法可以提高檢測(cè)的靈敏度和特異性。

最后，我們?cè)趯?shí)際應(yīng)用中，應(yīng)根據(jù)樣本特性和檢測(cè)要求選擇合適的干擾消除方法，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。