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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 89 |
| 訂貨量 | 1 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質 生產商
- 所在地 上海市
更新時間：2019-06-06 08:49:50瀏覽次數：182
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您收到MKN-28人胃癌細胞后，請按照以下方法進行操作：
取出25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置3-4小時以穩定細胞狀態，然后換用新鮮*培養液繼續培養或進行傳代。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，后放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；
4）待細胞*貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；
2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；
3）棄上清，沉淀用5ml*培養基重懸，接種25cm2培養瓶，于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；
4）第二天，換用新鮮*培養基繼續培養。
MKN-28人胃癌細胞常見問題及解決方法：
1、觀察細胞密度用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細胞密度；觀察細胞形態請用（10X 或 20X）高倍鏡觀察；
2、瓶中運輸的培養液不能重復使用，請換新鮮培養液培養；
3、有些細胞貼壁不牢，如發現貼壁細胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內；
4、收到細胞后，若發現培養瓶破損、漏液及細胞污染，請及時與我們。
5、培養瓶有破裂，培養液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。
6、細胞漂浮：培養瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養箱。1-2 小時后觀察，
7、如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以去掉，留 8-10ml 培養液培養觀察，細胞生長至匯合度 85-95%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁， 將細胞離心收集轉到新培養瓶，原培養瓶加部分培養液繼續培養，中間注意觀察，我 們的技術人員會一直跟蹤指導，直到問題解決。
8、細胞消化鋪板，細胞死亡較多。 *消化時間掌控好切勿消化過度，第二終止要*（以T25瓶為例，加1ml胰酶用5ml*培養基終止），第三控制吹打次數和力度，避免損傷。
我公司代理銷售ATCC來源，sciencell來源，上海細胞庫來源等細胞銷售，另我公司有自建細胞庫，生產培養各類細胞系，采用灌注法制備各種原代細胞。
