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1301人淋巴細胞的以下實驗方案介紹了貼壁培養哺乳動物細胞傳代的一般流程。請注意昆蟲細胞與哺乳動物細胞傳代的一些關鍵步驟有所不同。
1）裝有貼壁細胞的培養容器
2）經過組織培養處理的培養瓶、培養板或培養皿
3）*生長培養基，預熱至  37°C
4）一次性無菌 15-mL 試管
5）37°C  培養箱，充有二氧化碳濃度為 5% 的濕化空氣
6）平衡鹽溶液，例如：杜爾貝科鹽緩沖液  (DPBS)，不含、鎂和紅
7）解離劑，例如：胰蛋白酶或  TrypLE™ Express，不含紅
8）用于活細胞和總細胞計數的試劑和設備，例如：Countess® 自動細胞計數儀、臺盼藍染料和血球計數器，或者 Coulter Counter®  (Beckman Coulter)

1301人淋巴細胞傳代的*步是通過酶或機械方法將細胞從培養容器表面解離下來。
貼壁細胞傳代流程
所有與細胞接觸的溶液和設備均應為無菌狀態。必須采用正確的無菌技術，并且在層流通風櫥內工作。
1 .從培養容器中吸出用過的細胞培養基并丟棄。
2 .用不含和鎂的平衡鹽溶液沖洗細胞  (每  10 cm  2 培養表面積需要2 mL溶液)。從與貼壁細胞層相對的容器一側輕輕加入沖洗液，以避免攪動細胞層，前后搖晃容器數次。
注：沖洗步驟可去除可能抑制解離劑作用的少量血清、和鎂。
3 .從培養容器中吸出沖洗液并丟棄。
4 .向培養瓶中加入預熱的解離劑  (例如：胰蛋白酶或 TrypLE™)；試劑量應足以覆蓋細胞層(每  10 cm 2 大約 0 .5 mL)。輕輕搖晃容器，使試劑*覆蓋細胞層。
5 .將培養容器在室溫下孵育約 2 分鐘。請注意實際孵育時間根據所用細胞系不同而有所差異。
6 .在顯微鏡下觀察細胞解離情況。如果解離程度未達  90%，可將孵育時間延長幾分鐘，每30 秒鐘檢查一次解離情況。也可輕輕拍打培養容器以加快細胞解離。
7 .細胞解離程度大于等于 90% 時，傾斜培養容器，使細胞上液體盡快流盡。加入所用解離劑兩倍體積的預熱*生長培養基。吹打細胞層表面數次，使培養基分散。
8 .將細胞轉移到 15-mL 錐形管中，以 200 × g  的離心力離心 5 至 10 分鐘。請注意離心速度和時間依細胞種類不同而有所差異。
9 .  用少體積的預熱*生長培養基重新懸浮細胞沉淀，取出少量樣品進行計數。
10 .采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess® 自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。必要時，可再次向細胞中加入生長培養基，以便達到所需的細胞濃度，并重新進行細胞計數。
注：我們建議使用 Countess® 自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。Countess®自動細胞計數儀計數所需的樣本量與您目前使用的血球計數器所需量相同，且不到一分鐘即可完成一個樣本的典型細胞計數，適用于各種真核細胞。有關傳統血球計數器使用的更多信息，請參閱第 41 頁的"支持技術方案"部分。
11 .將細胞懸液稀釋到該細胞系推薦的接種密度，并將適量體積的細胞懸液轉移到新的細胞培養容器中，把細胞放回培養箱。
注：如果使用培養瓶，將其放入培養箱前應將瓶蓋旋松，以便進行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養瓶和透氣性瓶蓋。

細胞的傳代
懸浮細胞傳代比貼壁細胞傳代稍微簡單一些。由于細胞已經在生長培養基中懸浮，因此無需通過酶的作用使其從培養容器表面脫離，整個過程較為迅速，對細胞的損傷也較小。懸浮培養時不進行生長培養基的更換；而是每 2 到 3 天加料一次，直到細胞匯合。可以直接在培養瓶中稀釋細胞，然后繼續培養擴增，或者也可以從培養瓶中取出一部分細胞，將余下的細胞稀釋到該細胞系適宜的接種密度。懸浮細胞傳代后的延滯期一般比貼壁細胞短。

小鼠神經元細胞(原代細胞)懸浮培養容器
懸浮培養可采用未經組織培養處理的無菌培養瓶  (例如：不帶折流板的搖瓶)  進行；但是，專為懸浮細胞培養設計的轉瓶  (即：攪拌瓶)具有出色的氣體交換功能，可進行較大規模的細胞培養。

轉瓶有兩種基本設計；其培養基由懸掛的攪拌棒或者垂直的葉輪攪拌  (即攪動)。垂直葉輪的換氣效果更佳。轉瓶總培養體積不能超過轉瓶標示體積的一半，以便換氣充分(例如：500 mL  轉瓶中培養液體不能超過 250 mL)。