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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 3280 |
| 訂貨量 | 1 |
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- 所在地 上海市
更新時間：2019-05-30 17:29:48瀏覽次數：188
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人骨髓內皮祖原代細胞分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質間的網眼中，是一種海綿狀的組織，能產生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓單核細胞是一種未成熟的單核細胞，在骨髓細胞中約占0.04%，被認為是破骨細胞的前體細胞，較外周血單個核細胞誘導的破骨細胞得率高、全骨髓誘導法產生的破骨細胞數量多，純度高，較脾細胞誘導法分化效率高。骨髓單核細胞（BMMNCs）是從股骨或脛骨骨髓中分離提取出來的原代細胞，它屬干細胞類型。目前，大多數研究用淋巴細胞分離液分離提取骨髓單核細胞，近也有采用免疫磁珠分離法分離骨髓單核細胞。
本公司生產的骨髓單核細胞采用密度梯度離心法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經CD68免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM-F12、FBS、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用人骨髓單核細胞*培養基（產品貨號：CM-H185）作為體外培養人骨髓單核細胞的培養基。
人骨髓內皮祖原代細胞培養過程中，傳代是非常重要的環節，若操作不當會給細胞帶來不可逆轉的傷害，原代細胞因其培養難度高且傳代次數有限，細胞消化的步驟需要格外細心與謹慎。生物根據其豐富的原代細胞培養經驗，總結出一套細胞消化的方法，有效降低了消化步驟對細胞的操作?，F分享給大家：
1. 當細胞達到80-90%融合時需要傳代培養。
2. 提前準備好多聚賴氨酸（PLL，貨號KL0403）或纖維粘連蛋白（BPF，貨號KL8248）包被好的培養瓶。
3. 將*培養基，胰酶/EDTA消化液（T/E，貨號KL0103），胰胰中和液（TNS，貨號KL0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號KL0303）加熱至室溫。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養基。
4. 用DPBS沖洗細胞。
5. 以T-75培養瓶為例，向培養瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。輕輕搖動培養瓶保證細胞被胰酶/EDTA消化液*覆蓋。將培養瓶置于37度培養箱1-2分鐘直到細胞變圓。在顯微鏡下觀察細胞形態變化。
6. 在消化期間，準備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS，貨號KL0500）。
7. 將胰酶/EDTA消化液從培養瓶中吸出至50ml離心管中（一小部分細胞已消化下來），將培養瓶繼續置于37度培養箱中1-2分鐘（此時培養瓶中沒有液體）。
8. 在孵化結束時，輕輕拍打培養瓶側面使細胞脫離表面。在顯微鏡下檢查以確保所有細胞已脫離。
9. 向培養瓶中加入5ml胰酶中和液，將消化后的細胞轉移至50ml離心管中。再加入5ml胰酶中和液沖洗培養瓶，以保證所有細胞被收集。
10. 在顯微鏡下觀察剩余細胞數量以確定是否收集成功，細胞數量應小于5%。
11. 以1000轉/分離心收取的細胞懸液5分鐘，然后在培養基中重懸細胞。
12. 細胞計數，然后將細胞以推薦的細胞密度接種在包被好的培養瓶中。
