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上海雅吉生物科技有限公司
主營產品： 培養原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒 |
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| 參考價 | ￥ 3280 |
| 訂貨量 | 1 |
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- 所在地 上海市
更新時間：2019-05-29 15:13:43瀏覽次數：594
聯系我們時請說明是環保在線上看到的信息，謝謝!
組織來源：滑膜組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
小鼠心肌原代細胞（成年）分離自滑膜組織；滑膜組織是位于關節腔內面的內襯結構，各種關節內疾病均會累及滑膜。而滑膜細胞是維持關節正常功能的重要組織結構，同時在各種關節疾患中也是主要病變部位。骨關節炎（OA）以關節軟骨退行性變為特征，其病理改變累及關節的各個組成部分，但絕不僅局限于軟骨，還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響，相互作用，共同加速關節的退變。滑膜細胞是構成滑膜層的大細胞群體，是維持關節正常功能的重要組織結構，它包埋在顆粒狀無定性的基質中，基質內有分散的纖維分布。滑膜由A型（巨噬樣滑膜細胞）、B型（成纖維樣滑膜細胞）以及C型（樹突細胞樣滑膜細胞）細胞組成。滑膜細胞主要功能：①滑膜細胞產生潤滑液成分，并且與關節腔的吸收和血液/潤滑液交換有關；②滑膜細胞增生，表現為不依賴于支持物生長，并且分泌大量的效應分子來促進炎癥和關節損壞；③是自身自分泌和旁分泌網絡中效應因子的一部分。
本公司生產的小鼠滑膜細胞采用混合酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
我們推薦使用小鼠心肌原代細胞（成年）*培養基（產品貨號：CM-M083）作為體外培養小鼠滑膜細胞的培養基。
細胞一般儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以大限度的保存細胞活力。
細胞復蘇就是要把原本冷凍保存(凍存)著的細胞恢復到一般的生長狀態，今天我們來看看原代細胞的復蘇步驟。
一、檢查
收到細胞株包裹時，請檢查細胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即處理告訴寄方。細胞株請盡速開始培養，或立即冷凍保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。
二、冷凍細胞解凍
1、依據細胞株說明書的基礎培養基種類、血清種類和其它之成份和比例，制備培養基。
絕大多數之細胞均無法立即適應不同基礎培養基或不同的血清種類，若因實驗需要，必須有所不同時，務必以緩慢比例漸次改變培養基組成，確定細胞適應后，方進行所需之實驗。
2、 FBS (fetal bovine serum, 胎牛血清), CS (calfserum, 小牛血清)和HS (horseserum, 馬血清)，對細胞而言差異極大，請務必依據細胞株資料的血清種類培養細胞。
3、將培養基置于37 °C 水槽中回溫，回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之，移入無菌操作臺內。取出冷凍管，立即放入37 °C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化后，以70 % ethanol 擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺內。
4、依據細胞種類和濃度，于無菌操作臺內取10 ml 培養基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細胞懸浮液，緩緩加入T25 或T75 flask 內之培養基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養箱培養。
5、對絕大多數細胞而言，1 % 以下之冷凍保護劑DMSO，不會對細胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍細胞中去除，待第二天確定細胞生長或貼附良好后再去除即可。
對極少數因對DMSO 敏感或會造成細胞分化之細胞，需立即去除DMSO 者，則可將解凍后之細胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養基，將細胞均勻混合后，轉移至培養瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培養箱培養。
三、收到T25 flask 細胞時的處理方式
1. 于寄送過程中，為避免起泡造成細胞脫落死亡，T25 flask 均加滿培養基。請檢查flask 外觀，并于顯微鏡下觀察細胞生長狀況和有無污染現象，若有任何問題，不要打開蓋子，請立即通知細胞實驗室。
2. 將原封之T25 flask 靜置于37 °C， 5 % CO2 培養箱中，使細胞回溫至37 °C，并讓運送過程中少數脫落的細胞可再附著生長。
隔天后，于無菌操作箱內取出flask內之培養基，(取出之培養基可以再使用)，僅留約5-10ml 培養基于flask 內，依一般培養方式再將細胞置入培養箱中，或細胞已長滿盤，則將細胞做傳代培養。
四，細胞復蘇注意事項
1、整個復蘇過程盡量手腳麻利一些，戰線拉得太長可能影響復蘇效果;
2、由于“化冰”這一步里凍存管與水溫差太大，尤其是液氮里來的凍存管，放到水里可能會造成翻江倒海的既視感，所以可以用鑷子夾住凍存管往水里摁，這樣即使有炸裂的情況也會有水做緩沖;
3、取凍存管時要謹防凍傷，尤其是夏天，盡管熱也穿長袖白大褂，一些不經意的動作可能會把你的小鮮肉“粘”到冰箱門上;
4、離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進行，也就是直接把凍存管離心，離心后棄去原來的凍存液，然后直接加*培養基重懸細胞，接著把細胞轉到培養皿/瓶里培養。這種方法也許不能將DMSO清除得很干凈，但是基本影響不大。
5、 復蘇第二天記得去看看細胞，如果狀態還不錯的話就說明復蘇成功。
