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上海雅吉生物科技有限公司

主營產(chǎn)品: 培養(yǎng)原代細胞,細胞系價格,耐藥細胞株,實時熒光pcr試劑盒

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體(無形體)通用染料法熒光定量PCR試劑盒
體(無形體)通用染料法熒光定量PCR試劑盒
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更新時間:2019-05-24 15:32:36瀏覽次數(shù):161

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【簡單介紹】
體(無形體)通用染料法熒光定量PCR試劑盒反應中有兩條引物,即5′端引物和3′引物。設(shè)計引物時以一條DNA單鏈為基準(常以信息鏈為基準),5′端引物與位于待擴增片段5′端上的一小段DNA序列相同;3′端引物與位于待擴增片段3′端的一小段DNA序列互補。

體(無形體)通用染料法熒光定量PCR試劑盒實驗方法原理 多聚酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)是一種模擬天然DNA復制過程,在體外擴增特異性DNA(或RNA)片段的新技術(shù)。本實驗是將待檢雙鏈DNA經(jīng)94℃高溫變性成單鏈作模板,然后加入一對人工合成的寡核苷酸引物,引物分別與待擴增DNA片段的兩端互補,經(jīng)55℃ 低溫退火,引物與模板互補結(jié)合。在72℃條件下,結(jié)合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下,利用反應體系中的4種dNTP為原料,按堿基互補配對的方式延伸合成兩條新的DNA鏈。所擴增的DNA可作為下一輪擴增反應的模板。重復上述循環(huán)過程,經(jīng)過20~30個周期后,特異的目的DNA可擴增百萬倍以上。 PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳后即可觀察到特異的擴增條帶。
實驗材料 血清樣品
試劑、試劑盒 HBV-PCR反應液 HBV-DNA裂解液陽性模板溴化乙錠
儀器、耗材 PCR擴增儀電泳儀紫外線分析儀
實驗步驟 
一、標本處理

取混勻的血清20μl加20μl裂解液,攪勻后100℃沸水浴10分鐘,后15000rpm/min離心3分鐘,取4μl上清待檢。

二、加樣及PCR

取反應液一管(使用前稍加離心),加4μl待檢上清或陽性對照于底層反應液中,混勻后高速離心片刻,然后置PCR儀,設(shè)置程序94℃預變性2分鐘,再按94℃/30秒、55℃/30秒、72℃/60秒擴增35個循環(huán)。

三、電泳與結(jié)果判斷

取15μl 反應液,經(jīng)2%瓊脂糖凝膠電泳(5V/cm)30分鐘后,在紫外燈下觀察結(jié)果,若410bp處出現(xiàn)橙黃色帶,則HBV為陽性。
收起
體(無形體)通用染料法熒光定量PCR試劑盒注意事項 
1. 反應管中加好所有試劑后,應立即上機擴增,以免形成過多的二聚體。

2. 陽性模板可用陽性血清代替,處理方法同上。

3. 陽性模板及DNA提取液使用前需充分融化離心。

4. 反應也的表面為固體封蓋劑,電泳取樣時從反應管底部洗液。

5. EB為強致癌物,操作過程應注意防護。

6. 注意無菌操作,以免出現(xiàn)假陽性



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