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山東風(fēng)途物聯(lián)網(wǎng)科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 農(nóng)田小氣候觀測(cè)系統(tǒng),農(nóng)業(yè)氣象觀測(cè)儀器,校園教學(xué)氣象站 |
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公司信息
- 聯(lián)系人：
- 杜俊卿
- 地址：
- 山東省濰坊市高新區(qū)光電路155號(hào)濰坊高新區(qū)光電產(chǎn)業(yè)加速器（一期）1號(hào)樓209
- 郵編：
- 261000
| 參考價(jià) | ￥ 2500 |
| 訂貨量 | 1 臺(tái) |
- 型號(hào) FT-ZWSJ
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 濰坊市
聯(lián)系方式：杜俊卿查看聯(lián)系方式
更新時(shí)間：2021-03-03 15:57:48瀏覽次數(shù)：429
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熒光定量檢測(cè)試劑【用法與判定】
1用法
1.1樣品處理及模板準(zhǔn)備
1.1.1樣品處理
·組織樣品處理：分別從豬肉組織、淋巴結(jié)、脾臟不同位置取樣，用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.1g于研磨器中研磨，加入1.5ml生理鹽水繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5ml無菌離心管，12000 r/min離心2分鐘，取上清200μl備用。
·血液樣品無需處理，取200μl備用。
1.1.2模板準(zhǔn)備
·根據(jù)不同的樣本類型，按照下表準(zhǔn)備相應(yīng)的樣本用量。
·將樣本加入到1.5 ml離心管中，加入下表體積的Solution A，渦旋震蕩20 s，并按照下表的處理方法，室溫靜置3-5 min，或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min。
·樣本充分裂解后（95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢復(fù)室溫），加入下表體積的Solution B，并渦旋震蕩30 s，12000rpm離心2min，上清即為模板DNA。
·處理后的樣本如在2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行下一步試驗(yàn)，請(qǐng)于4℃保存，如不能立即進(jìn)行下一步試驗(yàn)，請(qǐng)于-20℃保存。
樣本類型 | 樣本用量 | Solution A | 處理溫度及時(shí)間 | Solution B |
全血 | 10μl | 100μl | 室溫靜置3-5min | 100μl |
唾液 | 100ul | 100ul | 室溫靜置3-5min | 100μl |
口腔拭子 | 1個(gè) | 400μl | 95℃，3-5min | 400μl |
組織勻漿 | 10μl | 100μl | 室溫靜置3-5min | 100μl |
備注：組織樣本加入10倍體積的生理鹽水制成組織勻漿液后，可按照血液樣本的處理方法進(jìn)行處理。
1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進(jìn)行反應(yīng)，效果更佳
1.2熒光PCR擴(kuò)增
1.2.1試劑準(zhǔn)備
實(shí)驗(yàn)前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復(fù)至室溫，使其*融化，充分混勻后瞬時(shí)離心去除管壁吸附液體。
1.2.2配制反應(yīng)體系
按下表1體系，在配套PCR管中配制反應(yīng)體系，蓋緊管蓋后瞬時(shí)離心10秒，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
表1 PCR反應(yīng)體系
成分 | 體積 |
PCR反應(yīng)液 | 18μl |
預(yù)準(zhǔn)備的模板（樣本/對(duì)照） | 2μl |
總體積 | 20μl |
1.2.3 PCR擴(kuò)增
快速模式
表2儀器PCR擴(kuò)增參數(shù)
階段 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
1 | 95℃ | 30s | 1 |
2 | 95℃ | 10 s | 40 |
60℃ | 20 s（采集熒光信號(hào)） | ||
FAM通道采集熒光信號(hào)，需要內(nèi)參的話請(qǐng)同時(shí)打開HEX/VIC熒光通道 | |||
2判定
2.1合理調(diào)整閾值線，不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進(jìn)行調(diào)整。
2.2試劑盒有效性判定
·陰性對(duì)照：無Ct值，線形為直線或微斜，無明顯指數(shù)增長(zhǎng)。
·陽性對(duì)照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，呈典型的S型曲線。
2.3樣本結(jié)果判定
·樣本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤38，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，判定為陽性，表明樣本中檢測(cè)出非洲豬瘟病毒。
·樣本檢測(cè)結(jié)果38＜Ct≤40，判定為可疑。應(yīng)對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)測(cè)，若復(fù)測(cè)結(jié)果Ct值仍在38~40之間，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)，則判定為陽性，否則為陰性。
·樣本檢測(cè)結(jié)果無Ct值，判定為陰性，表明樣本中未檢測(cè)出非洲豬瘟病毒。
熒光定量檢測(cè)試劑
