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上海宇淳生物科技有限公司

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蛋白含量(SP)試劑盒
蛋白含量(SP)試劑盒
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規格
96T260元1 盒 可售

更新時間:2024-06-05 15:18:22瀏覽次數:305

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【簡單介紹】
級別 其他
蛋白含量(SP)試劑盒
BCA 蛋白含量試劑盒提供一種簡單,快速,耐去污劑(最多 5%)的檢測蛋白質濃度 的方法。

蛋白含量(SP)試劑盒

蛋白含量(SP)試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 BCA 法蛋白含量測定試劑盒說明書 (貨號:WS8140F 分光法 96 ) 一、產品簡介: BCA 蛋白含量試劑盒提供一種簡單,快速,耐去污劑(最多 5%)的檢測蛋白質濃度 的方法。由于蛋白質能將 Cu2+還原成 Cu+BCA 可與 Cu+結合生成紫藍色復合物,在 562nm 處有光吸光值,顏色的深淺與蛋白含量成正比,因此可根據吸光值測定蛋白質濃度。 二、試劑盒組分與配制: 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑 A 液體 50mL×2 4℃保存 依據實驗用量,臨用前試劑 A:B=50:1 的比例混勻成反應 mix 試劑 B 液體 2mL×1 4℃保存 標準品 液體 1.5mL×1 4℃保存 若重新做標曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、臺式離心機、恒溫水浴鍋、移液器。 四、蛋白含量測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液(提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽水) 冰浴勻漿,12000rpm4℃離心 10min,取上清,即待測液。 【注】:依據研究經驗,一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數再進行測定,如 10 倍。實驗前可以先選 2 個樣本測定,摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數。 ② 細菌或細胞樣本: 先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液; 超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次), 12000rpm4℃離心 10min,取上清,即待測液。 【注】:依據研究經驗,一般需將樣本粗提液稀釋到適當倍數再進行測定,如 10 倍。實驗前可以先選 2 個樣本測定,摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數。 ③ 液體樣本:澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁,離心后取上清檢測。 2、上機檢測: ① 可見分光光度計預熱 30min,調節波長到 562 nm,蒸餾水調零。 反應 mix 置于 60℃水浴預熱 30 min(僅煮一次即可)試劑名稱(μL測定管 空白管(只做一次) 樣本 20 蒸餾水 20 反應 mix 800 800 混勻,于 60℃保溫 30min,全部轉移到 1mL 玻璃比色皿 中,于 562nm 處測定吸光值 A,△A= A 測定-A 空白。 【注】:若△A1.5,需將樣本用提取液稀釋后再測定。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結果計算: 1、標準曲線方程:y = 0.0687x - 0.0006x 是標準品質量:μgy 是△A2Cpr (mg/g 鮮重)=[(A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷(V1÷V×W) ×D =0.728×(A+0.0006) ÷W×D 3Cpr (mg/mL)=[(A+0.0006)÷0.0687×10-3]÷V1×D=0.728×(A+0.0006)×D 4Cpr (μg/104 cell))=[(A+0.0006)÷0.0687]÷(V1÷V×500)×D=1.46×(A+0.0006)×D V---提取液體積:1mLV1---加入粗提液體積:0.02mLW---樣本質量:gD---稀釋倍數,未稀釋即為 1500---細菌或細胞總數,萬。 附:標準曲線制作過程: 1 標準品母液(500μg/mL)。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標準品:0, 2.5,5, 25, 50, 250, 500. μg/mL。也可根據實 際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管加樣表操作,根據結果即可制作標準曲線。



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