| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥770 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 24T | 770元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-31 10:37:22瀏覽次數(shù)：318
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土壤芳基酰胺酶活性測定試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤芳基酰胺酶活性測定試劑盒說明書 （貨號：WS4430F 分光法 24 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 土壤芳基酰胺酶（Aryl-acylamidase，EC 3.5.1.13）可水解帶有酰胺基團(tuán)的化合物；本 試劑盒利用土壤芳基酰胺酶水解底物 L-亮*酸β-萘胺生成β-萘胺，β-萘胺接著與對二甲 氨基肉桂醛生成紅色偶氮化合物，該化合物于 540nm 處有特征吸收峰，通過檢測該紅色 物質(zhì)的增加速率，即可計(jì)算土壤芳基酰胺酶活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 6mL 蒸餾水，充分溶解備用， 試劑三 液體 14mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉劑 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下使試劑落入底部，再 加入 15mL 乙醇，充分溶解備用。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、乙醇、 可調(diào)式移液器。 四、土壤芳基酰胺酶活性測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣本情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣風(fēng)干或者 30℃烘箱風(fēng)干，先粗研磨，過 40 目篩，備用。 【注】：土壤風(fēng)干，減少土壤中水分對于實(shí)驗(yàn)的干擾；土壤過篩，保證取樣的均勻細(xì)膩； 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 0.1g 土壤 0.1g 土壤 試劑一 300 300 試劑二 100 混勻，于 37℃孵育 2h（間隔 30min 振蕩混勻一次） 95%乙醇 600 600 試劑二 100 立即混勻，于 12000rpm，室溫或 4℃離心 10min，離心 10min， 上清液待測。本試劑盒僅供科研使用 2 ③ 顯色反應(yīng)，在 EP 管中依次加入： 上清液 280 280 試劑三 280 280 試劑四 280 280 混勻，10min 后，全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）中，于 540nm 處測定吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（每個樣本做一個自身對照）。 【注】：1.若△A 值在零附近徘徊，可在 37℃孵育階段延長反應(yīng)時間 T(如增至 3h 或更長)，或增 加土壤樣本量 W（如增至 0.2g），則改變后的反應(yīng)時間 T 和 W 需代入公式重新計(jì)算。 2. 若 A 測定的值大于 1.8，可用乙醇對整個紅色顯色反應(yīng)液進(jìn)行稀釋，則稀釋倍數(shù) D 需代入公式參與計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 0.0546x - 0.016，x 是標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL）, y 是△A。 2、酶活定義：37℃條件下，每克土樣每小時釋放出 1μg 的β-萘胺為一個酶活力單位。 土壤芳基酰胺酶活性(μg/h/g 土樣)=(△A+0.016)÷0.0546×V1÷W÷T =9.2×(△A+0.016)÷W V1---孵育階段的反應(yīng)總體積，1mL； T---反應(yīng)時間，2h； W---樣本質(zhì)量，g； 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（2.5mg/mL）：標(biāo)準(zhǔn)品用 1mL 乙醇溶解。（母液需在兩天內(nèi)用）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 5, 10, 15, 20, 25. μg/mL。也可根 據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)顯色反應(yīng)階段測定管的加樣體系操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
