| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥1600 |
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型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質
經銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 1600元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-30 10:34:19瀏覽次數：304
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Caspase-3活性測定試劑盒,微板法
Caspase-3活性測定試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 Caspase-3 活性測定試劑盒說明書 (貨號：WS5121W 微板法 48 樣) 一、產品簡介： Caspase-3 又稱 CPP32、Yama 或 apopain，屬于 CED-3 亞家族，是細胞凋亡過程中的一 個關鍵酶。 利用 Caspase-3 分解底物 Ac-DEVD-pNA 產生黃色的對硝基苯胺（pNA），后者在 405nm 有吸收峰，通過測定吸光值升高速率即可得出 Caspase-3 酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規格 保存條件 備注 提取液 液體 60mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 10mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 液體 0.5mL×1 支 -20℃保存 低溫放置易凍住，放置室溫使其 解凍成液體再用，用不完的試劑 分裝后-20℃保存。 標準品 粉體 mg×1 支 4℃保存 若重做標曲則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、臺式離心機、可調式移液器、天平、研缽、冰和蒸餾水。 四、Caspase-3 活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進行冰浴勻漿。4℃×12000rpm 離心 10min，取上 清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 細菌或培養細胞 先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提 取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；4℃×12000rpm 離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照數量（104）：提取液體積(mL)為 500-1000：1 的比例進行提取 2、上機檢測： ① 酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 405nm。 ② 在 96 孔板中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 樣本 40 試劑一 150 試劑二 10 混勻，于 405nm 處讀取 A1 值，37℃反應 1h 后讀取 A2 值。本試劑盒僅供科研使用 2 【注】：1. 加完試劑二即啟動反應，所以試劑二加完混勻后立即檢測，若 A2 值大于 1.5，可減少樣本加 樣量 V1（如減至 10μL，則試劑一相應增加），或縮短反應時間 T（如由 1h 減至 30min），則改 變后的 V1 和 T 需代入公式重新計算。 2. 若ΔA 小于 0.01，可延長反應時間 T（如由 1h 增至 2h 或更長），則改變后的 T 需代入公式重 新計算。 五、結果計算： 1、標準曲線：y = 0.0291x - 0.0004：x 為標準品（對硝基苯胺）(nmoL)，y 為ΔA。 2、按樣本鮮重計算： 單位定義：每克組織每小時催化底物產生 1nmoL 對硝基苯胺為一個酶活單位（U）。 Caspase-3(nmoL/h/g 鮮重)=[(ΔA+0.0004)÷0.0291]÷(W×V1÷V)÷T=859.1×(ΔA+0.0004)÷W 3、按樣本蛋白濃度計算： 單位定義：每毫克組織蛋白每小時催化底物產生 1nmoL 對硝基苯胺為一個酶活單位（U）。 Caspase-3 (nmoL/h/mgprot)=[(ΔA+0.0004)÷0.0291]÷(V1×Cpr)÷T=859.1×(ΔA+0.0004)÷Cpr 4、按細胞數量計算： 單位定義：每 104個細胞每小時催化底物產生 1nmoL 對硝基苯胺定義為一個酶活單位（U）。 Caspase-3 (nmoL/h/104 cell)=[(ΔA+0.0004)÷0.0291]÷(500×V1÷V)÷T=1.72×(ΔA+0.0004) V---加入提取液體積，1 mL； V1---加入樣本體積，0.04mL； T---反應時間，1h； W---樣本質量，g； 500---細胞數量； D---稀釋倍數，未稀釋即為 1； Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（10μmol/mL）：臨用前甩幾下或離心，使粉體落入底部，加入 0.5mL 乙醇，渦旋震蕩溶解后再加入 0.5mL 的蒸餾水混勻，得到 10μmol/mL 備用。 2 用蒸餾水把母液稀釋成以下濃度：0, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5μmol/mL。也可根據實際來 調整濃度。 3 40μL 標準品+160μL 試劑一，混勻后于 405nm 處讀取 A 值，依據結果即可制作標準 曲線。 ΔA=A2-A1。
